鸡6-延长酶(elo6)ELISA科研试剂盒

(交流）大批量酶联免疫吸附检测术（ELISA）的简易做法

）的Human IL6 ELISA READY-SET-GO 盒，商家推荐操作流程为：1用包被抗体包被酶联板（4度过夜）→2洗三遍（第I洗）→3加入阻断缓冲液（通常为含10%小牛血清或5%脱脂奶粉的洗液），室温下放置1小时→4洗三遍（第II洗）→5加入样本，室温下放置1小时→6洗五遍（第III洗）→7加入检测抗体（生物素标记），室温下放置1小时→8洗五遍（第IV洗）→9加入亲合素标记的HRP反应液，室温下放置半小时→10洗七遍（第V洗）→11加入酶底物显色→12终止反应→13用酶联仪读板。在此流程中前后共有

别小瞧了ELISA

微量加样的准确性和均一性。加在孔壁上部的非包被区，易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。出现气泡则反应液界面有差异。试剂的加入在国产试剂盒中基本上均是从滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外，滴加的速度也很重要，滴加太快，很容易出现重复滴加或加在两孔之间的现象，这样就会在孔内的非包被区出现非特异吸附，从而引起非特异显色。所以，有时候一份标本用相同的试剂盒这次测定为阳性，下次测定为阴性，往往就是上述加样及试剂的错误所致。 四、温育 温育是ELISA测定中影响测定成败最为关键的一个因素

如何正确操作ELISA

一、标本的收集和保存 　　用于ELISA测定的临床标本最为常用的是血清。 　　（1）要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。 　　（2）样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌