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文献和实验ELISA protocol: 1.取5-10ul BMMY表达上清用0.05M NaHCO3稀释到100ul铺ELISA板,37度或室温振荡大于1小时。注意一定要做一个GS115空菌株表达上清作为阴性对照,最好还找一个带有histag的蛋白作为阳性对照。 2.TPBS洗板3次,方法:倒掉铺板液,倒置于毛巾上轻轻拍打几次,加TPBS至满,重复。 3.加封闭液(TPBS加1%脱脂奶粉)350ml/孔,室温下放置40分钟-1小时,TPBS洗3次。 4.加封闭液稀释
1000kb不等。即使是同一种细胞,选择过程不同,基因扩增的范围也不同。 然而,出现了更有效的扩增系统—GS扩增系统——GS(谷氨酰胺合成酶)扩增系统是新近发展的更有效的系统,具有更高的扩增效率。 这是为什么? 谷氨酰胺合成酶在ATP水解提供能量时,利用细胞内的氨和谷氨酸合成谷氨酰胺,在缺乏细胞外谷氨酰胺的培养条件下,加入谷氨酰胺合成酶抑制剂甲硫氨酸亚砜(MSX),可使GS 基因及与之相连的目的基因扩增,达到提高目的基因表达水平的目的,由于只有多拷贝的GS 编码基因才能抗MSX
指动物细胞不是因外源性感染而是在染色体组上保持着的病毒(Retrovirus中的 provirus)时,此病毒即称为内源性病毒。此类病毒多呈不显性感染。内源性病毒为什么存在于生殖细胞内或开始就是动物所具有的病毒的原始型?现在都还不清楚。原始病毒是通过精子和卵来遗传的,其遗传基因的发生被调节而分成若干个。根据其发生的状态,表现为产生细胞性辅助因子(例如鸡的辅助者因子 CHF)、产生致肿瘤 RNA病毒的族特异性抗原( gs抗原),全部发生时则产生病毒等各种各样的状态。在小白鼠身上发生时多引起
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