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上海维亦特生物科技有限公司
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文献和实验ELISA 实验,来检测外泌体的蛋白量,从而实现对外泌体的分析。但是 ELISA 方法容易受其他抗原的干扰,引起实验结果出现偏差。 六、如何检测和研究外泌体? 外泌体内含有与细胞来源相关的蛋白质和核酸,可通过细胞膜受体直接激活受体细胞,也可运输蛋白质、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA,甚至细胞器进入受体细胞,参与细胞间通讯。 通过高通量技术对外泌体 RNA 进行分析,可快速高效获得外泌体 RNA 的全面信息。不同细胞来源的外泌体所含有的 RNA 和蛋白成分不太相同
膜的改变是这些特征中较早出现的一种。在凋亡细胞中,细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的外侧。Annexin-V是一种35-36 KD的钙粒子依赖的磷脂结合蛋白,它对PS具有较高的亲和力。细胞凋亡时,可以和外翻的PS结合,从而可以检测凋亡的细胞。发生坏死的细胞其细胞膜上的PS也外翻,因而也会阳性。因此,常用的凋亡试剂盒除了采用Annexin-V标记之外,还会加一种DNA染料,常用的有PI和7-AAD,由于坏死的细胞膜通透性增高,染料可以进入细胞内和DNA结合,从而可以发荧光,区分出坏死
也可用斑点式点样器点样,再与特异性探针进行杂交。本法可用于基因组中特定基因及其表达产物的定性及半定量分析。由于其操作比Northern印迹简单、迅速,所需样品量少,且可在同一张膜上同时进行多个样品的检测,故很适合于临床应用。亦可用于DNA的检测。但其缺点是不能鉴定所测基因的分子量。(一)主要试剂1. RNA提取试剂:TRIZOL试剂(Gibcol,No.15596-026),DEPC水(Fluka,No.980210)2. 质粒提取试剂盒:(Promega:Wizard Minipreps DNA
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