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上海维亦特生物科技有限公司
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文献和实验免疫印迹法(immunobiotting test,IBT)
与Bis的总百分浓度,C是Acr:Bis的重量百分比,T恒定,C为4%时,有效孔径最小,C大于或小于4%时,有效孔径均变大;C恒定,T增加,有效孔径降低。聚合过程由TEMED(四甲基乙二胺)和过硫酸铵激发。 阴离子去垢剂SDS能破坏蛋白质中的氢键和疏水键,按一定比例和蛋白质分子结合成复合物,使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷量,掩盖了各种蛋白质分子间的天然电荷差异;加入巯基乙醇使电泳的迁移率不再爱原有分子形状的影响。蛋白质的迁移率将主要取决于其分子量的大小 基本步骤:
质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行,而所用条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并尽可能减少其相互间的聚集。最常用的方法是将强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用,并通过加热使蛋白质解离后再加样于电泳凝胶上。变性的多肽与SDS结合并因此而带负电荷,由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关,因此SDS多肽复合物在聚丙烯酰凝胶电泳中的迁移只与多肽的大小相关。在达到饱和的状态下,每克多肽约可结合1.4克去污剂,借助已知分子量的标准参照物,则可测算出多肽链的分子量。 SDS聚丙
【资源】个人整理 Western Blot(步骤简略,但注意事项、经验总结、基本原理很全面)
,再从封闭开始,后续步骤同前。Western的原理几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行,而所用条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并尽可能减少其相互间的聚集。最常用的方法是将强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用,并通过加热使蛋白质解离后再加样于电泳凝胶上。变性的多肽与SDS结合并因此而带负电荷,由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成正比而与其序列无关,因此SDS多肽复合物在聚丙烯酰凝胶电泳中的迁移只与多肽的大小相关。在达到饱和的状态下,每克多肽约可结合1.4克去污剂,借助已知分子
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