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上海维亦特生物科技有限公司
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文献和实验管显色适当时,即可终止酶反应。(三)洗涤洗涤在ELISA过程中不是反应聚,但却是决定实验成败的关键。洗涤的目的是洗去反应液中没有与固相抗原或抗体结合的物质以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯待塑料对蛋白质的吸附作用是普遍性的。因此在ELISA测定的反应过程中应尽量避免非特异性吸附,而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。在标本和结合物的稀释液和洗涤液中加入聚山梨酯(吐温,Tween)一类物质即右达到此目的。聚山梨酯是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯,为非离子型的表面
【专题讨论】杆状病毒——昆虫细胞蛋白表达系统,影响蛋白表达的因素?
方法扩增P3贮液,用于高效表达。 三、 病毒贮液初步鉴定 1. SDS-PAGE蛋白电泳:取P2或P3病毒贮液浓缩后上样(或直接上样)进行SDS-PAGE蛋白电泳,初步根据分子量对表达蛋白进行鉴定。 CAT-his融合蛋白分子量约为28KDa,nsp6-his融合蛋白分子量约为34KDa。 2. western blot:以小鼠抗his单克隆抗体鉴定在相应条带出是否有his标记。 3. 以CAT-ELISA检测试剂盒检测Bacmid/CAT对照的蛋白表达情况。方法详见CAT
后,经高速离心12000r/min,30min后取上清备用。③凝胶过滤用SephadesG200柱进行,洗脱液测定尿素酶活性并将其活性峰与相应菌全菌蛋白,上柱液及离心沉渣进行SDS-PAGE分析,观察尿素酶提纯效果,Western blot分析是将尿素酶活性峰,经SDS-PAGE将各蛋白分离后,经电泳将蛋白转移到硝酸纤维膜上,处理、染色照相,并记录结果。 1.3 血清抗Hp尿素酶抗体的检测 血清抗Hp尿素酶抗体的检测:采用ELISA(按照Kesumen法改良
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