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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
Cell Meter™ Fluorescence Gap Junction Tracing Kit
- 库存：
50
- 供应商：
广州市左克生物科技发展有限公司
- 规格：
100Tests
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
间隙连接是由连接蛋白构成的专门的细胞间膜通道，可选择性促进<1.5 kD的小分子通过细胞。它们受电压，生长因子，cAMP和类维生素A的紧密调节，并且受磷酸化调节。Cell Meter 荧光细胞间隙连接检测试剂盒为体外测定间隙连接功能提供了可靠而强大的检测方法。该方法是非侵入性的。对研究中的细胞群进行划分，以使其中一小部分载有亲脂性细胞质膜可渗透染料Calcein UltraGreen™AM，当细胞质酯酶吸收细胞时，该染料会水解，从而生成Calcein UltraGreen（一种高度荧光且保留良好的膜） -不可渗透的分子。另一部分是DiD，它是一种亲脂性膜染料，在掺入膜时会横向扩散，使整个细胞膜染成深红色荧光。将两个部分混合并在共培养条件下孵育。钙黄绿素UltraGreen通过间隙连接转移到DiD染色的细胞中。可以通过荧光成像或流式细胞术检测。
适用仪器
| 流式细胞仪 | |
| 激发： | 488 nm and 640 nm激光 |
| 发射： | 530/30 nm and 660/20 nm滤波片 |
| 通道： | FITC和APC通道 |
| 荧光显微镜 | |
| 激发： | FITC和Cy5滤波片组 |
| 发射： | FITC和Cy5滤波片组 |
| 推荐孔板： | 黑色透明 |
样品分析方案
概述
将钙黄绿素Ultragreen AM工作溶液添加到细胞中
将DiD工作溶液添加到细胞中
在37°C下孵育10-30分钟
用GAP连接检测缓冲液洗涤细胞
将细胞重悬于细胞培养基中并按1：1比例混合
使用带有530/30 nm和660/20 nm发射滤光片的流式细胞仪或带有FITC和Cy5滤光片组的荧光显微镜在不同时间检测荧光信号
储备溶液配制
注意：将未使用的Calcein Ultragreen AM储备溶液分装在-20°C下，一次性使用，以免冻融循环。
注意：一个样品瓶足以进行50次测试。
注意：将未使用的DiD储备溶液分装在-20°C下，以单次使用，以免冻融循环。
注意：不宜储存Calcein Ultragreen AM工作溶液，应立即使用。
注意：1 mL Calcein Ultragreen AM工作溶液足以进行两次测试。
注意：DiD工作溶液不宜存储，应立即使用。
注意：1 mL DiD工作溶液足以进行两次测试。
操作步骤
- 在6孔细胞培养板的细胞培养基中培养细胞。
- 除去细胞培养基，并加入0.5 mL钙黄绿素Ultragreen AM工作溶液。
- 在37°C下孵育细胞10-20分钟。
注意：应为每个细胞系优化孵育时间。 - 除去染料工作溶液，并用GAP连接分析缓冲液洗涤细胞。
注意：对于贴壁细胞，请使用细胞橡胶刮板将细胞从板上分离下来。 - 在细胞培养基中重悬细胞。
- 在6孔细胞培养板的细胞培养基中培养细胞。
- 除去细胞培养基，并加入0.5 mL DiD工作溶液。
- 在37°C下孵育细胞10-20分钟。
注意：应为每个细胞系优化孵育时间。 - 除去染料工作溶液，并用GAP连接分析缓冲液洗涤细胞。
注意：对于贴壁细胞，请使用细胞橡胶刮板将细胞从板上分离下来。 - 在细胞培养基中重悬细胞。
- 将钙黄绿素染色的细胞和DiD标记的细胞以1：1的比例混合，并铺在孔中。
注意：对于荧光显微镜，将每个50 µL加到96孔板的孔中并混合均匀。
注意：对于流式细胞仪，将每一种加入500 µL到6孔板的孔中并混合均匀。 - 在37°C下孵育细胞2-3小时。
- 使用FITC和Cy5滤光片组通过荧光显微镜检测细胞。
- 对于流式细胞仪分析：对于贴壁细胞，使用细胞橡胶刮板分离细胞。一旦细胞处于悬浮状态或对于悬浮细胞，请用DPBS或您选择的缓冲液洗涤细胞两次。将细胞重悬于HHBS（#20011）或DPBS或您选择的缓冲液中，并使用530/30 nm滤光片（FITC通道）和660/20 nm滤光片（APC通道）检测。
图示
图1.通过流式细胞仪分析了GAP连接。根据方案，分别用钙黄绿素超绿AM和DiD对HeLa细胞进行染色。将细胞以1：1的比例充分混合，并用细胞培养基重新铺片。使用带有FITC和APC通道的NovoCyte流式细胞仪（ACEA Biosciences）检测反应。随着时间的推移，Q2-2（双阳性）增加。
参考文献
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Cx43-Gap Junctions Accumulate at the Cytotoxic Immunological Synapse Enabling Cytotoxic T Lymphocyte Melanoma Cell Killing.
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Gap junctions contribute to anchorage-independent clustering of breast cancer cells.
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文献和实验〔l〕在中生动物二胚虫类的体表细胞中，体前端二环列并排的 8— 9个细胞称为极细胞。以其密生短纤毛和细胞体为小的多面体这一点，与其下面的体表细胞（躯细胞）相区别。第一环列的 4个细胞称为前极细胞（ propo-lar cell），而第二环列的 4— 5个细胞称为后极细胞（ metapolar cell）。这些细胞可附着在寄主（章鱼、乌贼）的肾囊壁上或用以穿孔肾囊壁游出外界。在躯干细胞前端有 2个类似极细胞的细胞，特称为侧极细胞（ parapolar cell）。〔 2〕在昆虫的胚胞形成前
characteristics, depending on the media, the temperature and the strain of cells utilized. For bacteria (and some algae, fungi and other eukaryotic tissue culture) it is possible to measure the growth of cell populations by calculating cell number or mass
你那里天气怎么样？柚子这里已经被高温侵袭啦！又快到吹着空调吃西瓜的日子了呢。《Cell Stem Cell》杂志是2007年Cell出版社新增两名新成员之一（另外一个杂志是Cell Host & Microbe），这一杂志内容涵盖了从最基本的细胞和发育机制到医疗软件临床应用等整个干细胞生物学研究内容。这一杂志特别关注胚胎干细胞、组织特异性和癌症干细胞的最新成果。《Cell Stem Cell》自创刊以来就倍受关注，影响因子迅速提升，从0一冲至16.826，又达到了23.394。其中最受关注
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