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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
Cell Meter™ Colorimetric MTT Cell Proliferation Kit
- 库存：
50
- 供应商：
广州市左克生物科技发展有限公司
- 规格：
1000Tests
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞活力的工具。 Cell Meter 比色法MTT细胞增殖检测试剂盒使用MTT（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四氮唑溴化物）定量活细胞的数量。水溶性MTT在代谢活性细胞中产生水不溶性紫色甲瓒。产生的甲瓒的数量与活细胞的数量成正比。在560 nm附近测得吸光度增加。与其他需要繁琐的增溶步骤来溶解不溶于水的甲瓒产物的其他商业MTT测定法不同，Cell Meter 比色MTT细胞增殖试剂盒只需很少的人工操作。我们专有的配方去除了费时的增溶步骤。它是确定细胞增殖和细胞毒性测定中活细胞数量的强大的MTT试验。检测灵敏度比传统的MTT分析高10倍。
样品分析方案
概述
在96孔板中制备细胞（100 µL /孔）
添加MTT工作溶液（140 µL /孔）
在37°C下孵育2-4小时
读取560 nm处的吸光度
注：使用前，请在室温下解冻所有试剂盒组分。
工作溶液制备：
通过将4 mL MTT试剂A（组分A）与10 mL MTT试剂B（组分B）（2：5，MTT试剂A：B的体积比）混合，制备所需的MTT工作溶液量，混匀。
注意：14 mL MTT工作溶液足以在96孔板上进行100次测试。实验前准备足够的MTT工作溶液，并及时使用。
操作步骤
1.在具有透明底的组织培养孔板中，培养1000至40,000个细胞/孔。
2.将测试化合物添加到细胞中，并在37°C，5％CO2培养箱中孵育所需的时间（例如24、48或96小时）。3.对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的测试化合物。对于96孔板，建议的总体积为100 µL，对于384孔板，建议的总体积为25 µL。
注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定增殖或诱导细胞毒性的细胞密度。对于增殖测定，使用较少的细胞；对于细胞毒性测定，请使用更多的细胞作为开始。
4.向每个孔中加入140 µL /孔（96孔板）或35 µL /孔（384孔板）。
5.在37°C下孵育平板2-4小时，避光。
注意：根据不同的细胞类型和使用的细胞浓度，孵育时间可能从2小时到过夜。优化每个实验的孵育时间。
用吸光度板读数器在OD = 562 nm处检测吸光度。
图示
图1.用Cell Meter 比色法MTT细胞增殖试剂盒确定细胞数。将0至40,000个细胞/孔/ 100 µL的HeLa细胞添加到透明的底部96孔板中过夜。使用SpectraMax读数器（Molecular Devices）在560nm处检测吸光度。
参考文献
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文献和实验四唑盐（MTT）：噻唑蓝 原理：MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法.活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，溶液颜色深浅与活细胞数成正比。 优点：简单快速、灵敏、经济 缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害。应用：新药筛选、细胞毒牲试验、肿瘤
实验原理 MTT检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济
细胞肿瘤杀伤活性的体外评价过程涉及到免疫细胞和肿瘤细胞两种细胞共培养，因此不能采用传统的细胞增殖活性检测手段（如MTT、ATP等方法）直接进行检测。目前常用的免疫细胞杀伤研究方法包括51铬释放试验、流式细胞术、3H 胸腺嘧啶和 ATP 检测。这些方法步骤繁琐，耗费时间和人力，很难实现对效应细胞和靶细胞之间相互作用的研究。 Incucyte® 高通量实时活细胞分析系统 Incucyte® 位于细胞培养箱内，可以长时程自动采集相差和荧光图片，实时观察并全自动分析肿瘤细胞杀伤和免疫细胞与肿瘤细胞之间
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