钙离子荧光探针Cal-520N, 钾盐

钙离子荧光探针Cal-520N, 钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针，Cal-520®提供了一种功能强大的基于荧光的均质检测工具，用于检测细胞内钙的动员。Cal-520®AM是一种新型的荧光钙敏感染料，与现有的绿色钙指示剂（如Fluo-3 AM和Fluo-4 AM）相比，信噪比和细胞内滞留性显着提高。表达通过钙信号的感兴趣的GPCR或钙通道的细胞可以预装可穿过细胞膜的Cal-520®AM。一旦进入细胞内，Cal-520 AM的亲脂性封闭基团就会被酯酶裂解，从而产生带负电荷的荧光染料，并留在细胞内部。与钙结合后，其荧光大大增强。当细胞被激动剂刺激时，该受体发出信号释放细胞内钙，可以显着提高Cal-520®的荧光。Cal-520®AM具有长波长，高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性，使其成为测量细胞钙的理想指示剂。高信噪比和更好的细胞内滞留性使Cal-520®钙测定成为评估GPCR和钙通道靶标以及筛选其激动剂和拮抗剂的强大工具。Cal-520®钠盐或钾盐是细胞中Cal-520®AM的水解盐。它选择性地与钙离子结合，并具有强烈​​依赖于钙浓度的荧光。与其他Cal-520®指标相比，Cal-520N 对钙的亲和力低，Kd〜90 uM。荧光增强100倍，使Cal-520®AM成为测量细胞钙的理想指示剂。，为您提供优质的钙离子荧光探针Cal-520N, 钾盐。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液，10％Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
 

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Cal-520N ，AM原液。
2.1Cal-520N ，AM使用量：1毫克
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Cal-520N ，AM与435.56μL无水DMSO混合。
 

3.使用10μMCal-520N ，AM 4在HHBS中制备2X工作溶液，0.08％Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1终孔内浓度为Cal-520N ，AM：5μM
3.2Pluronic®F-127的终孔内浓度：0.04％
3.3终孔内浓度的丙磺舒：1mM
3.4在合适的容器中混合16μL的Cal-520N，AM，25.6μL的10％Pluronic F-127和256μL的25mM丙磺舒。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2 mL。
注意：对于大多数细胞系，我们建议使用Cal-520N™的终浓度，AM为4至5μM。
注意：推荐的Pluronic F-127井浓度终为0.02％至0.04％。
注意：推荐的终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的终浓度调节至以下：5μMCal-520N，AM，0.04％Pluronic®F-127,1mM丙磺舒。
 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育60-90分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为4 mL。
 

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 492/514 nm运行实验。

 

参考文献

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