鬼笔环肽Phalloidin CAS 17466-45-4

产品外观形态：固体（注：鬼笔环肽系列产品有固体和液体两种，液体为DMSO溶解后的产品，则不需再溶解。）

鬼笔环肽是一种双环七肽毒素，特异性结合在F-肌动蛋白亚基之间的界面上，将相邻的亚基锁定在一起。鬼笔环肽与肌动蛋白丝的结合比与肌动蛋白单体的结合要紧密得多，从而导致肌动蛋白亚基从丝端解离的速率常数降低，因此通过防止丝解聚而基本稳定了肌动蛋白丝，终，发现鬼笔环肽抑制F-肌动蛋白的ATP水解活性。因此，鬼笔环肽以不同于G-肌动蛋白的构型捕获肌动蛋白单体，并通过大大降低单体解离的速率常数来稳定F-肌动蛋白的结构。鬼笔环肽在细胞中不同浓度下的功能不同，当以低浓度引入细胞质时，鬼笔环肽将聚合度较低的胞质肌动蛋白和纤维蛋白吸收到聚集的肌动蛋白聚合物的稳定“岛”中，但它不会干扰应力纤维，即厚的微丝束。鬼笔环肽的性质是研究F-肌动蛋白在细胞中分布的有用工具，方法是用荧光类似物标记鬼笔环肽并将其用于染色肌动蛋白丝以进行光学显微镜检查。鬼笔环肽的荧光衍生物已被证明在定位活细胞或固定细胞中的肌动蛋白丝以及体外观察单个肌动蛋白丝方面非常有用。荧光鬼笔环肽衍生物已被用作高分辨率研究肌动蛋白网络的重要工具。AAT Bioquest可以提供多色成像应用的鬼笔环肽。

样品分析方案

概述

在微孔板孔中制备样品

从板中的样品中取出液体

添加鬼笔环肽溶液（100μL/孔）

在室温下染色细胞20至90分钟

清洗细胞在显微镜下观察样品

注意：将小瓶加热至室温并在打开前短暂离心。

 

操作步骤

1.制备1000 X鬼笔环肽DMSO储备液：将30μLDMSO加入装有粉末的小瓶中。

2.制备1X鬼笔环肽缀合物工作溶液：加入1μL1000X鬼笔环肽缀合物DMSO溶液至1 mL含1％BSA的PBS。

注意1：鬼笔环肽缀合物未使用的1000X DMSO储备溶液应等分并储存在-20℃，避光。

注意2：不同的细胞类型可能染色不同。 应相应地制备鬼笔环肽缀合物工作溶液。

3.染色细胞：

3.1进行甲醛固定，在室温下将含3.0-4.0％甲醛的细胞在PBS中孵育10-30分钟。

注意：避免使用任何含甲醇的固定剂，因为甲醇会在固定过程中破坏肌动蛋白。 优选的固定剂是不含甲醇的甲醛。

3.2用PBS冲洗固定的细胞2-3次。

3.3可选：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定细胞3至5分钟，以增加渗透性。 用PBS冲洗细胞2-3次。

3.4将100μL/孔（96孔板）鬼笔环肽缀合物工作溶液加入固定的细胞，并在室温下染色细胞20至90分钟。

3.5在加上盖玻片之前，用PBS轻轻冲洗细胞2至3次以除去过量的鬼笔环肽缀合物，然后在显微镜下进行，密封和成像。

 

参考文献

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