Gal尾2Gal尾-BM

手把手教你做好体外 DNA 重组

下空气蒸发残存的乙醇。3. Oligo(dT) 纤维素层析法提取 mRNA【实验原理】真核细胞的 3』端有 poly(A) 尾，因此可用 Oligo(dT) 纤维素结合 mRNA，从而将 mRNA 从总 RNA 中分离出来。Oligo(dT) 纤维素就是将 Oligo(dT)15～18 结合到纤维素上，制备成能特异性结合带 Poly(A) 尾 RNA 的纤维素。【实验试剂与器材】（1）Oligo(dT) 纤维素（2）层析柱装置（3）1×上样缓冲液：20 mM Tris.Cl (pH7.6)，0.5M

PCR技术系列：PCR产物克隆方法

平端连接通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效 率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能 在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为 3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR 产物的效率通过较高，。在采用大量T4DNA连接酶并配以5-10u T4 RNA连接酶时，可显著提高其连接效率。对于较短PCR产物，用PUS19 的HincⅡ位点进行克隆，以X－gal和IPTG筛选，常可得到足量重组

TA克隆常见问题分析及其解决方案

，因而氨苄敏感菌可生长。建议：检查氨苄平板是正常制备并在一个月内使用。问题：菌株（如TOP10）丧失F’因子。建议：检测背景对照，如果菌落不是蓝色的，则可能是宿主菌细胞丢失F’因子（假设acIqZ.M15 位于宿主菌的F’因子上，并使用正常平板）。用于T-载体系统的感受态细胞一定要正确制备。问题：平板不适合蓝白斑筛选。 检测背景对照，如果克隆菌不是蓝色的，检查平板是否含有氨苄/IPTG/X-Gal 以及是否新鲜。如平板有问题，重新制备新鲜平板。可能的原因：含有目的PCR产物的克隆菌数不够。 PCR