µ-Slide 8孔腔室载玻片，Collagen IV底部处

优化你的类器官培养水凝胶选择

反应性聚合物与多肽均匀反应。样品孵育20 min，使RGD肽连接到聚合物的马来酰亚胺基上。 3.将交联剂（PEG细胞不可降解交联剂或CD细胞可降解交联剂）加到无菌培养皿*表面。交联剂不要铺开，要保持单滴的液滴形式。 * 可使用多孔板（6、24或96孔）或适用的无菌培养板或培养瓶。推荐使用未经组织培养处理的聚苯乙烯。如需细胞成像，建议使用带细胞培养腔室的载玻片，比如Millicell® EZ SLIDE 8孔无菌腔室载玻片（货号PEZGS0816） 4.在含有水、缓冲液、FAST巯基反应性聚合

在无血清细胞培养条件下将人 iPS 细胞体外分化为结肠类器官

类器官扩增培养基(SCM304)添加到每个孔中。 立即将板转移到 37 °C ，5% CO2 培养箱中培养 48 小时。 每 2 天用 3dGRO™ 人结肠类器官扩增培养基 (SCM304) 更换培养基，直到分化第 12 天。 注：结肠球状体将在第 12 天结束时形成，使用 3dGRO™ 人类结肠类器官扩增培养基(SCM304)，其将嵌入ECM 基质胶中以生成成熟的结肠类器官。 将终浓度为 10 µM 的 ROCKi Y-27632 (SCM075)添加到人结肠类器官扩增培养基(SCM304

关于细胞趋化实验及系统搭建，我们整理了这份攻略

IMC- 800T 倒置相差显微镜（2）KOSTERCAM 500 万像素高分辨率摄像头及 KOSTERMAS 显微图像处理软件（3）KOSTER & IBIDI 显微镜活细胞培养装置 （4）细胞趋化通道载玻片（5）ImageJ 软件，细胞趋化和迁移 Plugin。 五、可视化细胞趋化实验系统优势（1）系统采用的通道载玻片具有超薄底部及高质量光学性能，合适高端显微镜及获得优质的成像效果。（2）能实时观察细胞趋化情况，计算每个细胞的趋化速率（通过后期实验数据分析，根据细胞的运动轨迹和时间算出运动速率