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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名:
RS1大鼠皮肤成纤维样细胞
- 库存:
100
- 供应商:
上海淳麦生物
- 细胞类型:
RS1大鼠皮肤成纤维样细胞
- 物种来源:
皮肤;成纤维样细胞
- 运输方式:
常温/干冰
- 年限:
10
- 生长状态:
贴壁/悬浮
- 规格:
T25/冷冻管
RS1大鼠皮肤成纤维样细胞培养前的准备
在您带上手套开始细胞培养之前,先检查一下移液管和瓶子的数量是否充足,以免在开始实验后再次出入操作台,这样可以降低细胞污染的风险。细胞培养基也应先预热,选择只预热部分培养基而非整瓶加热,不但可以节约实验时间,而且可以避免因反复加热培养基而造成的蛋白质降解。结束操作后,别忘了培养基对光敏感,应尽可能避光保存。
细胞培养的定期检查
定期检查培养细胞的形态,即形状和外观,对于细胞培养实验取得成功至关重要。除确认细胞的健康状态外,每次操作细胞时通过肉眼和显微镜检查细胞还可早期发现污染征象,避免污染扩散至实验室其他细胞。
培养瓶/皿等物品的无菌操作
无菌培养瓶、试剂瓶、培养皿等物品使用时方可揭开盖子,不得将其开放暴露于环境中,操作完成后尽快盖上盖子,取下盖子时应将盖子开口朝下放在工作台面上。
RS1大鼠皮肤成纤维样细胞培养中可能的污染物
细胞培养污染物主要分为两类:化学污染物,如培养基、血清和水中的杂质、内毒素、增塑剂和去污剂。生物污染物,如细菌、霉菌、酵母、病毒、支原体以及其他细胞系的交叉污染。可通过充分了解污染源以及采用良好的无菌技术,降低污染发生的频率和严重程度。
细胞换液注意事项
为细胞换液时,要沿着培养瓶的一侧轻轻地加入,而不是直接加到细胞中,以免损伤细胞,当培养的细胞株较为脆弱时尤其需要注意。使用无菌玻璃吸管或一次性塑料吸管和移液器操作液体时,每支吸管只能使用一次,以免交叉污染。
细胞传代的时间把握
当细胞呈指数增殖,贴壁培养的细胞已占据所有可用基质、没有扩增空间,或悬浮培养的细胞已超过培养基质所支撑的能力,无法进一步生长时,细胞增殖速度将大大降低甚至完全停止。为了将细胞密度维持在最佳水平,以便细胞继续生长,并且刺激进一步增殖,必须对细胞进行传代。
细胞培养中使用抗生素的注意事项
细胞培养时不应长期使用抗生素,因为连续使用抗生素会促进抗生素耐药性细胞株的产生,导致轻度污染持续存在。抗生素只能作为对付污染的最后手段短期使用,并尽快撤除。如果长期使用抗生素,则应同时进行无抗生素培养,以便作为鉴别隐性感染的对照。
RS1大鼠皮肤成纤维样细胞培养方法:
1、您收到细胞后,请按照以下方法进行操作:
取出25cm2培养瓶,75%酒精擦拭培养瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态,然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。
2、细胞传代:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀细胞用12ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代,最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)待细胞完全贴壁后,观察培养结果,之后进行换液培养或传代。
3、细胞冻存:
1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃25cm2培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化,轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3)用适量的冻存液(FBS:DMSO=9 :1)重悬细胞,并放置于冻存管中;
4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h,然后将其移入-80℃过夜,24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
4、细胞复苏:
1)从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37℃水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;
2)将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中, 1000rpm离心5min;
3)弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种25cm2培养瓶,于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
4)第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。
相关细胞的形态供参考:









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