CW2107M 康为世纪 金牌无内毒素质粒大提试剂 负压法

康为世纪 金牌无内毒素质粒大提试剂 负压法

产品名称：康为世纪 金牌无内毒素质粒大提试剂 负压法

产品货号：CW2107M

英文名称：GoldVac EndoFree Plasmid Maxi Kit

产品规格：10 preps

产品介绍：

内毒素是质粒提取中常见的污染物，由于真核细胞对内毒素非常敏感，因此，如果质粒中含有内毒素会大大降低真核细胞转染效率。本试剂盒提供一种快速、易大规模质粒制备的新方法。每次可处理100-300 ml菌液，获得多至2 mg转染级质粒DNA。使用真空装置可同时纯化多个样本，45分钟即可完成质粒提取，有效减少手动操作时间。特殊的缓冲液系统和除内毒素过滤器，有效去除内毒素、基因组DNA、RNA、蛋白等杂质。本试剂盒所得质粒纯度高、提取量大，特别适用于细胞转染，同时也可用于DNA测序，PCR，体外转录，内切酶消化等实验。

产品组份： 

产品特点：

1.提取速度快:利用真空装置，40分钟内快速纯化多个样本，有效减少手动操作时间

2.提取得率高:可从100-300 ml菌液，获得多至2 mg转染级质粒DNA。

3.产品品质高:提取的质粒DNA适用于大多数细胞株的高级转染实验。

配套试剂：

无水乙醇、异丙醇、真空泵、废液收集装置、真空纯化装置。

产品使用说明：

1．取100-300 ml过夜培养的菌液，加入离心管（自备）中，12,000×g离心2-3分钟收集细菌，尽量吸弃全部上清。

2．向留有菌体沉淀的离心管中加入12 ml Buffer P1（请先检查是否已加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮细菌沉淀

3．向离心管中加入12 ml Buffer P2，温和地上下颠倒混匀8-10次，使菌体充分裂解，室温放置3-5分钟。此时溶液应变得清亮粘稠。

4．向离心管中加入12 ml Buffer E3，立即上下颠倒混匀8-10次，此时出现白色絮状沉淀，室温放置5分钟。将溶液全部倒入除内毒素过滤器中，慢慢推动推柄过滤，滤液收集在干净的50 ml离心管中。

5．向滤液中加入0.3倍滤液体积的异丙醇，上下颠倒混匀

6．正确连接负压装置，将连接管与DNA吸附柱连接好后插到负压装置的插口上

7．柱平衡：向DNA吸附柱中加入2 ml Buffer PS，开启并调节负压至-300~-700 mbar，吸去柱上溶液。

8．将步骤5中滤液与异丙醇的混合溶液转移到平衡好的吸附柱中，吸去柱上溶液。

9．向DNA吸附柱中加入10 ml Buffer PW吸去柱上溶液。

10.保持负压抽吸10分钟，除去吸附膜内残留漂洗液，干燥吸附膜。若一次抽吸6个样品以上，可将负压抽吸时间适当延长。待吸附膜*干燥后，关闭负压开关。

11.将压力恢复至0 mbar时，取下吸附柱，将DNA吸附柱置于一个新的50 ml离心管中，向吸附膜的中间部位加入1-3 ml Endo-Free Buffer EB，室温放置2-5分钟，12,000×离心5分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。

保存条件：

室温 (15-30℃)