重组 BKPyV 蛋白，N-His

重组子的检测

[ 实验目的 ] 通过本实验学习 PCR 反应的基本原理与实验技术。 通过本实验学习重组质粒的检测技术。 [ 基本原理 ] 聚合酶链反应（ polymerase chain reaction ， PCR ）是体外酶促合成特异 DNA 片段的一种技术。在待扩增的 DNA 片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后， DNA 扩增 2 n 倍。 PCR 进行的基本条件是： （ 1 ）以 DNA 为模板（在 RT － PCR 中模板是 RNA ）； （ 2 ）以寡核苷酸

重组胰蛋白酶最适 PH 和 PH 稳定性

样品：重组胰蛋白酶，比活 4500USP u/mg pro.，上海雅心生物技术有限公司，纯度如图 1 所示。BAEE，Sigma. 图 1. 重组胰蛋白酶的纯度的 SDS-PAGE 鉴定 1. 最适 pH 的研究 准备 pH 为 3~12 的底物 BAEE（0.25 mM），分别测定 rPT 纯酶液的活性，最后结果表示为测定数值占最高酶活的百分比。缓冲液成分依次为 25 mM NaAc-HAc (pH 3~6)，25 mM Tris-HCl (pH 7~8)，25

重组胰蛋白酶最适温度和温度稳定性

4、底物溶液（2.5 mmol/L）：精密称取 N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE）（Sigma）42.8 mg，加入相应 50 ml 体积的测活缓冲液，使其溶解，即为 2.5 mmol/L 的底物母液，现配现用, 使用时，用测活缓冲液 10 倍稀释。 5、供试品：精密称取待测样品适量。平行分装 3 支，置于蓝冰保温运输箱内，室温下放置。 实验方法： 1、重组胰蛋白酶运输条件下的稳定性：样品测定活性，作为初始活性。蓝冰于-20℃ 充分预冷后，取出，与样品同时放入泡沫保温运输