ZC101 蛋白过表达试剂盒

蛋白过表达试剂盒
Protein Overexpression Kit
本产品冰袋运输，转染试剂、表达增强剂置于 4℃避光保存，赠品置于 -20℃保存，保质期 12 个月。

货号规格

 

产品内容
 

产品特点
good转染效率高——可在含血清与抗生素的完全培养基中转染，在有无血清的条件下均可发挥作用；
good细胞毒性低——独特的组合配方zui大程度减少对细胞的损伤，保持细胞活性；
good适用范围广——适用于大多数常见的哺乳动物细胞系的 DNA 转染，如悬浮细胞（CHO-S、Expi293F、HEK293F、HEK293S 等）﹐ 贴壁细胞（HEK293T、Hela、NIH/3T3、MCF-7、CHO-K1、Hep G2、COS-1、COS-7 等）；
good适配性强——尤无需使用特定培养基稀释转染试剂，使用培养细胞所用的同种培养基 ( 不加血清 )即可；
good操作便捷——操作方法与传统转染方法一致，且细胞转染后无需换液，只需添加表达增强剂即可。

产品简介
good雅酶蛋白过表达试剂盒（ZC101）基于一种高效的转染试剂，配合使用表达增强剂，可将携带目的基因的质粒转染至真核细胞内并高效表达。本试剂盒可在极少量细胞中完成蛋白过表达情况的检测，帮助操作者迅速判定所构建的基因在细胞系中的表达情况。
good根据表达蛋白在细胞内的分布类型，本试剂盒提供了三种可作为转染阳性参照的质粒（均以pcDNA3.1 为载体，Amp 抗性），可分别在哺乳动物细胞系中过表达胞内蛋白 GFP（32 kDa），分泌蛋白MBP（45 kDa）和跨膜蛋白 KCNQ4（82 kDa）。三种质粒均为无内毒素质粒，浓度均为 200 ng/μL，可直接用于细胞转染，也可作为模板进行目的基因的构建。三种质粒的蛋白基因上均含有 His/Strep/Flag/HA四种常见的标签蛋白基因，便于操作者采用与之适配的标签抗体进行 Western Blot 检测。
good此外，本试剂盒额外提供 HRP 偶联的 DYKDDDDK-tag 抗体（直标抗体），无需使用二抗，经1:10,000 稀释后可直接用于阳性参照蛋白和含有 Flag-tag 目的蛋白的 Western Blot 检测。

 

必要的额外材料
good细胞培养板（贴壁细胞）；25 mL 规格细胞培养瓶（悬浮细胞）。

使用说明
good1.按下表提前准备细胞。对于贴壁细胞 ( 以 6 孔板为例 )，根据细胞的生长情况，提前一天使用胰酶消化处理后铺板，确保转染当日细胞总数量为 1×106 个 / 孔，或者细胞长满 80% 以上区域即可；

good2. 将准备好的 无内毒素质粒 和 转染试剂 分别使用与培养细胞一致的 培养基 ( 不加血清 ) 进行稀释，静置 5 min；

good3. 吸取转染试剂稀释液，缓慢加入质粒稀释液中，充分混匀后静置 10 min；
good4. 将步骤 3 中的混合液缓慢地滴加在含细胞的 6 孔板或培养瓶中，轻轻摇晃均匀； 
good4. 注意：6 孔板应轻轻“十”字摇晃，避免旋转摇晃。
good5. 将细胞静置培养 12~16 h 后（即过夜培养），向 6 孔板或培养瓶中加入终浓度为 6% 的 表达增强剂（6孔板 120 μL/ 孔，摇瓶 240 μL/ 瓶），轻轻摇晃均匀；
good4. 注意：由于染料的特殊理化性质，使用前请摇匀。
good6. 将细胞继续培养 24 h；
good7. 按以下步骤准备样品进行 Western Blot 检测：
good4. ◆对于贴壁细胞中过表达的胞内 / 跨膜蛋白，可吸尽板孔中的培养基，转移至2mL EP管中，板孔中加入裂解液于摇床中 4℃裂解 5~10 min，将EP管中的培养基离心收集细胞沉淀，并用少量裂解液裂解，合并两次细胞裂解液，离心 (4℃，12,000×g，3 min)，取上清与上样缓冲液 ( 货号：LT101 或 LT103) 混和；
good4. ◆对于悬浮细胞，可按照每 100 μL 细胞沉淀加入 50~100 μL 裂解液的比例处理样品；

注意事项
good1. 转染所用质粒应为无内毒素质粒，未去除内毒素的质粒对细胞损伤较大；
good2. 参照质粒表达的 KCNQ4 为四聚体蛋白，单体大小为 82.3 kDa，在一些细胞系中表达后的 WB 结果会有多聚体条带；
good3. 不同细胞系对表达增强剂的敏感性不同，若细胞转染后状态不佳，可将表达增强剂的比例由 6% 降为3%；
good4. 若采用12孔板或24孔板进行细胞转染，本试剂盒分别可使用200次或400次，每孔试剂用量如下；