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- 上海科梦达生物
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- K1098
- 2025年09月18日
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上海科梦达生物
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20次
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上海科梦达生物主营：动物血清血浆全血，各种浓度红细胞，ELISA试剂盒，生化试剂盒，PCR试剂盒，胎牛血清（Gibco/BI/Gemini/PAN等），细胞（细胞系，原代细胞），培养基，各类抗原，抗体，抗血清，感受态细胞，考马斯亮蓝蛋白快速染液等，液相检测， 气相检测 ，液质联用检测 ，常规生理生化测定，土壤检测，elisa检测服务（购买本公司ELISA试剂盒免费代测）
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文献和实验，不同的裂解液配方溶解效率不同，通常使用的 NP-40、RIPA 等裂解液无法将所有蛋白全部溶出（如图 2），已经有研究发现细胞骨架、细胞外基质蛋白及部分膜蛋白、核蛋白等属于难溶蛋白，在提取过程中会形成不可溶沉淀[3]。如果目的蛋白属于这类难溶蛋白，仅使用可溶性组分（上清）用于 WB 实验时，目的蛋白将无法被检测到。针对这种情况，我们可以选择更加有效的裂解液配方，或者使用柱式蛋白提取法来增溶目的蛋白。例如，使用柱式法总蛋白提取法，可有效溶解难溶蛋白，避免不可溶组分的产生，有效解决蛋白丢失问题
蛋白及内参蛋白常常会丢失在被丢弃的不可溶组分中，仅使用可溶性组分研究不严谨。3. RIPA buffer 提取的蛋白图谱偏差会得出错误或偏差结论，特别是涉及目标蛋白的定量问题时。解决方案：看了这些例证，是不是有点明白你凋亡研究 WB 为什么没成功了？主要是你的蛋白样品出现了问题，使用 RIPA不严谨，必须要解决蛋白丢失，溶解度差，得到真正意义上完整的蛋白图谱。Invent 公司的柱式法蛋白提取试剂盒，可以帮你解决蛋白丢失问题，得到完整的蛋白图谱，是细胞凋亡研究的理想选择！
WB 是检测和定量磷酸化蛋白质的重要实验方法，然而大家一直都说磷酸化蛋白 WB 不好做！这是因为处于不同的细胞生长状况和 / 或特定的细胞周期时，磷酸化蛋白可能仅占细胞总蛋白中的一小部分，处理不得当时，还会快速的去磷酸化。磷酸化蛋白质 WB 做不好的原因有许多，比如封闭问题，抗体问题，或所需的磷酸化蛋白可能不存在于样品中或者低于 WB 检测的量。然而，有一个常被大家忽视的重要原因就是蛋白样品制备所用的方法是否适合于磷酸化蛋白的提取？其实蛋白质提取的方法不仅影响提取效率，还会影响蛋白的质量
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