甲基原薯蓣皂苷

DNA甲基化研究方法的回顾与评价（上）

。Oefner等1992年[20]提出变性高效液相色谱法（DHPLC）用于分析单核苷酸和DNA分子。邓大君等2001[21]将其改进与PCR联用建立了一种检测甲基化程度的DHPLC分析方法。将重亚硫酸盐处理后的产物进行差异性扩增，由于原甲基化的在重亚硫酸盐处理时仍被保留为胞嘧啶，因此原甲基化的在PCR扩增时，其变性温度也相应上升，使PCR产物在色谱柱中保留的时间明显延长，这样就可以测定出PCR产物中甲基化的情况。 这种方法的最明显优点是：可用于高通量混合样本检测，能够明确显示目的片段中所有CpG位点甲基

DNA甲基化研究方法的回顾与评价（下）

酶HhaⅠ（GCGC）或HpaⅡ（CCGG）的识别位点,这样，经探针和目标序列杂交后，降低反应体系温度，并向其中加入连接酶HhaⅠ，若原样本DNA中含有HhaⅠ识别的非甲基化的位点，则非甲基化探针的两个寡核苷酸部分不能连接，而甲基化的探针顺利连接不被切割，在随后的PCR反应中只有两个寡核苷酸部分连接后的探针才能被扩增。最后分析扩增片段，确定待研究位点的甲基化情况（具体过程见图8）。 图8：甲基化特异性多连接依赖性探针扩增（MS-MLPA）示意图。用设计好的甲基化与非甲基化的探针（探针各寡核苷酸部分

麦角甾醇 ergosterol

　　C18 H44 O，麦角甾 -5， 7， 22-三烯 -3β -醇， 24s-甲基胆甾 -5， 7， 22-三烯 -3β -醇。含于酵母、麦角、香蕈等中的甾醇。是重要的维生素 D原之一，经紫外线作用成为麦角钙化醇（ ergocalciferol，维生素 D2 ）。易溶于热醇、醚、氯仿中，与毛地黄皂苷形成分子化合物。