E TAG (HRP)PA121895

超亲和性的新型亲和标签系统“PA Tag System”

大阪大学蛋白质研究所藤井勇树、高木淳一东北大学大学院医学系研究科金子美华、加藤幸成 前言在分析蛋白质的功能时最重要的是如何得到高纯度的蛋白。现今提纯蛋白最常用的方法是亲和标签系统。被统称为「Epitope Tag」的肽标签以及其单克隆抗体组成的系统有FLAG、HA、Myc等多种标签。但是，每个标签系统都有优缺点，并不存在完美的标签系统。于是，在克服了众多难关后我们终于开发出有超高亲和性的新型亲和标签系统“PA Tag System”1）。 PA tag的起源Epitope Tag

干货 | CUT and Tag 核心酶 Hyperactive PA/PG-Tn5 Transposase 大解密

比高、实验周期短（ 1 天实现从细胞到文库构建）、可重复性好等显著优势，尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。 图 1. CUT&Tag 原理图 由于 CUT&Tag 主要是针对极低细胞起始量进行实验，因此对核心酶原料有着极高的要求。CUT&Tag 技术的核心原料酶是 Hyperactive PA/PG-Tn5 Transposase ，它具有高活性，对微量 DNA 有高灵敏度和高亲和力，能有效抓取数十个细胞中的有限结合位点等特点

干货| CUT and Tag 技术全方位解答

凝集素，四聚体球蛋白，含有糖基结合位点，因此 ConA 是一种糖类结合蛋白。ConA 磁珠能与细胞膜上的糖蛋白结合，从而吸附细胞，使对细胞的实验操作可视化，减少在后续实验过程中的细胞的损失。 不建议使用离心法代替 ConA beads，因为离心法不适合于低细胞数，在洗涤的过程中，损失很大，而且大肠杆菌残留的 DNA 无法进行可靠的校准。 5.做 ChIP-seq 的时候不需要二抗，CUT&Tag 二抗的作用是什么？二抗是必须的吗？可以用带修饰（比如 HRP 修饰）的二抗