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- 赛默飞（Thermo Fisher）
- OST00222W-100UL
- 2025年07月05日
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文献和实验Using Phospho‐Motif Antibodies to Determine Kinase Substrates
Figure 18.20.1 The specificity of phospho‐motif antibodies. HeLa cells were serum‐starved for 24 hr prior to being stimulated with 50 ng/ml IGF‐1 or 100 nM PMA for 10 min. Lysates were immunoblotted with anti‐Akt/PKB phospho‐motif (left panel
管 8 管，第一管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在第一管中加入 2 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二 管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。 3. 10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。 4. 洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸
，避光4℃孵育30分钟到60分钟。5、将破膜缓冲液（#00-8333）用去离子水1:9稀释，制成工作液（每个样本的用量为4~5ml）。6、无需洗涤，直接加入2ml破膜缓冲液工作液（1：9稀释好）300-400g离心洗涤细胞并弃去上清液（可选）重复洗涤一次。7、加入100 ul流式染色缓冲液重悬细胞体系中加入2 ul 胞内抗体来源的血清，室温避光孵育30分钟。8、体系加入适量的核内（及胞浆）抗原抗体，对照管加入等量的同型对照，按说明书条件孵育。9、加入2ml破膜缓冲液工作液离心洗涤细胞并弃去上清
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