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文献和实验在 DMF 中稳定,因此,可以用 100 mL DMF 溶解 0.4 g AEC 作为贮存液备用; (2) 加 l mL AEC 溶液 至 15 mL 0.1 mol/L 的乙酸钠缓冲液(pH5.2)中,并搅拌; (3) 加 0.15 mL 3% 过氧化氢于水中。过氧化氢一般是 30% 的溶液提供,在 4℃ 可存放 1 个月; (4) 用滤纸过滤; (5) 加此溶液到标本中,并于室温孵育 10~40 min,水洗终止反应; (6) 优化:如果需要复染,只可用水溶性染料; (7) 用 Gelvatol
结果)。 2.操作步骤 (1)用lmlDMF溶解4mgAEC。AEC在DMF中稳定,因此,可以用100mlDMF溶解0.4gAEC作为贮存液备用; (2)加lmlAEC溶液至15ml 0.1mol/L的乙酸钠缓冲液(pH5.2)中,并搅拌; (3)加0.15ml 3%过氧化氢于水中。过氧化氢一般是30%的溶液提供,在4℃可存放1个月; (4)用滤纸过滤; (5)加此溶液到标本中,并于室温孵育10~40min,水洗终止反应; (6)优化:如果需要复染
一、戊二醛二步法1. 原理戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。2. 标记步骤(1)称取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中,于室温静置过夜。(2)反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱,用生理盐水洗脱。流速控制在1ml/1分钟,收集棕色流出液。如体积大于5ml,则以PEG浓缩至5ml。放置25ml小烧杯中,缓慢搅拌。(3)将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml,搅拌下逐滴加入酶溶液中。(4)用1M
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