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文献和实验在无血清细胞培养条件下将人 iPS 细胞体外分化为结肠类器官
4+、c-Kit+、Sox-17+、PDGFR-和FOXA2+。 步骤2:后肠内胚层分化(第 4-8 天) 从培养箱中取出含有第 4 天定形内胚层培养物的 6 孔板。 从每个孔中吸出培养基。 用 3 mL 1X PBS 清洗每个孔。 在每个孔中加入 2 mL 预热的后肠诱导培养基(SCM303)。 立即将板转移到 37 °C ,5% CO2培养箱中 孵育24 小时。 重复步骤 2-5,共 5 天。 后肠内胚层分化的第5天是确定 CDX2 表达的关键时间点。CDX2 的表达必须 >60
: 1. Prepare Whole Cell Extract. Make sure every solution DOES NOT contain DTT. 2. Add 1 or 2 μl of non-diluted monoclonal antibody (4B4 is better than 10H8 for HSF1) or 1/10 diluted polyclonal antibody to 10 μg of whole cell extract
Western Analysis of Transgenic Plants
are transferred to a solid support, which is normally nitrocellulose or polyvinylidene fluoride (PVDF [Millipore, Bedford, MA]). Immunological detection of proteins transferred to a solid support combines ease of handling with accessibility of antibodies
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