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- 赛默飞（Thermo Fisher）
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- 2025年07月01日
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文献和实验样。 ( 4 ) 将 RNA 样品进行电泳检测。凝胶包含 15% 聚丙烯酰胺、7 mol/L 尿素、1xTBE，pH 8.5。20 cm 凝胶使用的电泳参数为 260 V/47 mA ( 见注5 ) 。 ( 5 ) 用电印迹的方法将胶转移到 Hybond-N+ 膜（Amersham Biosciences) 上，使用 25 mmol/L 磷酸钠缓冲液，pH 6.5，15 V/200 mA 电转过夜。用紫外线（1200~2400 μJ ) 交联尼龙膜。 ( 6 ) 在杂交时，可以使用 Arnbion
的关系， 尽量多上就行了， 但是不要超过0.3μg/mm2。S. 一抗，二抗的比例是否重要？解答：比较重要，调整好一抗，二抗的比例，可以去掉部分非特异的本底。3. 抗体T. 做细胞信号传导，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？解答：对二抗无要求，要看你实验条件来选择，一般推荐用HRP标记的二抗。U. 同一公司的另外抗体用这个稀释度做出来效果很好，所以没做预试，怕费时间，用什么样的稀释度比较好呢？我用的ELL+plus试剂盒显色。转膜过夜，一抗孵育也是过夜的，若封闭也过夜
信号传导，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？解答：对二抗无要求，要看你实验条件来选择，一般推荐用HRP标记的二抗。S. 同一公司的另外抗体用这个稀释度做出来效果很好，所以没做预试，怕费时间，用什么样的稀释度比较好呢？我用的ELL+plus试剂盒显色。转膜过夜，一抗孵育也是过夜的，若封闭也过夜的话就要四天才看的到结果了。解答：不同抗体，即使是同一公司的抗体，其最佳的抗体稀释度也是不一样的，需要你实验摸索。我觉得转膜过夜好像没有必要吧，转膜的目的也就是将蛋白转到膜上就行啦，何必浪费
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