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文献和实验酵母细胞。 3. 构建DNA-BD/靶蛋白质粒pLexA-X,作为钓饵(bait)。 4. 将上述钓饵质粒pLexA-X转化EGY48(p8op-LacZ)细胞株,用SD/-His/-Ura筛选;并用固体诱导培养基SD/Gal/Raf/-His/-Ura检测此DNA-BD/靶蛋白是否具有直接激活报告基因的活性,以及对酵母细胞是否具有杀伤毒性。 转化质粒 选择培养基 克隆生长情况 说 明 (含有Gal/Raf) pLexA-Pos SD/-His,-Ura
bp) 双链RNA ,从而验证RNaseIII 的消化能力,结果表明,1个单位的RnaseIII 在37度1小时可以将1mg 的双链RNA 降解为30bp以下,主要是1215bp 的siRNA s 混合物。用其他基因的双链RNA ,同样证实RNaseIII 能够消化各种双链RNA 序列。另外用Cyclophillin, c-myc, Map Kinase 9, PKC-alpha, Raf-1, Nautilus, 和 h-ras 等基因的双链RNA 作为 RNase III 底物,也可以得到同样
GAPDH ,La 和c-FOS(200 bp) 双链RNA ,从而验证RNaseIII 的消化能力,结果表明,1个单位的RnaseIII 在37度1小时可以将1mg 的双链RNA 降解为30bp以下,主要是12―15bp 的siRNA s 混合物。用其他基因的双链RNA ,同样证实RNaseIII 能够消化各种双链RNA 序列。另外用Cyclophillin, c-myc, Map Kinase 9, PKC-alpha, Raf-1, Nautilus, 和 h-ras 等基因的双链
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