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- 2025年07月01日
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文献和实验jingjingyufu 我想通过western来观测cullin4a蛋白质在小鼠胚胎成纤维细胞中的表达情况，可是做了很多次的western，条带不出的时候居多，即使出了，条带的大小与目的条带的大小也不一样，要比目标带小20KD左右，cullin4a主要功能是参与蛋白质的泛素降解，会不会是因为蛋白质降解了所以条带变小或是此带是非特异性的条带，想请教一下对cullin4a蛋白了解的高手指点一下，不胜感激！ lalala_2004
: 1. Prepare Whole Cell Extract. Make sure every solution DOES NOT contain DTT. 2. Add 1 or 2 μl of non-diluted monoclonal antibody (4B4 is better than 10H8 for HSF1) or 1/10 diluted polyclonal antibody to 10 μg of whole cell extract
5415R），摇床（ORBITAL SHAKER，TS-1000），电泳仪（Tanon EPS300）。低速离心机（cat:TDZ4B-WS）。2、实验方法制样：细胞裂解液配制：基础裂解液中加入 PMSF，cocktail 和 DTT实验分组：Control 组 、化合物 11（10μM）、化合物 11（20μM)、化合物 11（40μM），给药时间 24 h。弃培养上清，PBS 洗一遍，冰上加入 150ul/孔裂解液。于冰上裂解 30 min，为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。裂解完后，于 4℃
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