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文献和实验, dry 5. block half of the plate (with platelets) by PBS-BSA 1% and coat another half by glycine (x1) - BSA for 1 hour at 37ѓC 6. wash 3 times in PBS-tween 20, dry 7. incubated at 37ѓc for 1 hour with a 1:1000 dilution of rat IgG2a anti-mouse kappa
were resolved in 4 to 20% SDS-polyacrylamide gels and electrophoretically transferred to nitrocellulose filters from Schleicher & Schuell (Keene, NH) for 2 h at 140 mA. The filters were blocked with blocking buffer (TTBS; 150 mM NaCl, 50 mM Tris, 0.2% Tween 20
转膜: 小分子量的蛋白半干转效果比较好, 大分子量(100KD)以上建议湿转。 具体转膜条件需要多摸一下。30-80KD半干转恒流1mA/cm2,1-1.5h 都可以,大分子湿转100V,2.5h以上应该可以,转完膜丽春红染出的条带比较清楚的话,一般都能有结果。 湿转,Buffer一定要预冷,最好提前一天配好放4度;滤纸不要大过PVDF膜,防止短路;胶在负极,膜靠近正极,放入Tank前检查一遍会使你免以体会放反的痛心疾首;膜要标记好正反面;转膜过程中,经常过去看看,防止
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