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文献和实验antibody dilution buffer: TBS-T supplemented with2% (w/v) BSA. 6. Antibodies: Phospho-b-catenin Ser33/Ser37/Thr41, phospho-glycogen synthase Ser641, and glycogen synthase (CellSignaling Technologies, Beverly, MA); b-catenin and GSK-3b(BD PharMingen, San
Place stack upside down (gel side up) on blotter. Blot at 0.8 mA/cm2 (~38 mA per gel) for 1-2 hrs. Place the membrane on a piece of blot paper and dry for 2 hrs (or longer) at room temp or soak the membrane in 100% methanol for 10
转膜时间为30-60分钟。也可以在15-20mA转膜过夜。 具体的转膜时间要根据目的蛋白的大小而定,目的蛋白的分子量越大,需要的转膜时间越长,目的蛋白的分子量越小,需要的转膜时间越短。 在转膜过程中,特别是高电流快速转膜时,通常会有非常严重的发热现象,最好把转膜槽放置在冰浴中进行转膜。 转膜的效果可以观察所使用的预染蛋白质分子量标准,通常分子量最大的1-2条带较难全部转到膜上。 转膜的效果也可以用丽春红染色液对膜进行染色,以观察实际的转膜效果
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