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文献和实验: 1. Prepare Whole Cell Extract. Make sure every solution DOES NOT contain DTT. 2. Add 1 or 2 μl of non-diluted monoclonal antibody (4B4 is better than 10H8 for HSF1) or 1/10 diluted polyclonal antibody to 10 μg of whole cell extract
的。ATG5 在死亡肿瘤细胞中高表达,因此成为抗肿瘤治疗成功与否的重要指标,而 ATG12-ATG5-ATG16L 复合物的形成对自噬隔离膜的延伸是至关重要的。LC3 是 Atg8 在哺乳动物细胞中的同源物,LC3B-I(定位于胞浆) 与磷脂酰乙醇胺(PE)共价连接并插入到自噬体的双层膜中形成 LC3B II。LC3 偶联到自噬体上以及 LC3-I 转换成 LC3-II,已被用来作为自噬评价和测定的公认指标。自噬溶酶体形成自噬体与溶酶体的直接融合形成自噬溶酶体,形成过程中主要是 LAMP1、Rab
Monitoring the Intracellular Routing of Internalized Antigens by Immunofluorescence Microscopy
1 and LAMP1, and can be easily adopted to other antigen-presenting cells or antigens.
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