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文献和实验in detail here. The first protocol is essentially a dual-pulldown assay employing Flag-tagged DNMT3A or antibody of choice for an endogenous protein and 5' biotin linked antisense RNA (Figure 1a), while the second protocol is a triple pulldown assay which essentially expands
迄今为止,蛋白阵列(protein arrays)主要有两种形式:一种是抗体阵列(antibody arrays),利用阵列上的抗体识别样品中的蛋白或其他分子;另一种则是我们今天要谈到的靶蛋白阵列(target protein arrays),通过阵列上的蛋白检测这些我们感兴趣的蛋白和其他分子,如药物、抗体、核酸、脂类或其他蛋白的作用。由于有高通量的优点,蛋白阵列是研究蛋白功能的好工具。但是,通常的靶蛋白阵列生产方式是分别得到不同的蛋白,纯化后再借助各种化学连接将它们点样到阵列上。这样的方式
蛋白或是其中的部分.比如6x His Tag、β-半乳糖苷酶融合蛋白和trpE融合蛋白、谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白以及硫氧还蛋白(Trx)融合蛋白等. 由于利用tag的特性通常可以对融合蛋白进行亲和层析等分离提纯,更多情况下选择融合表达是为了简化重组 蛋白的纯化.因此出现两种融合表达类型:一是fusion tag位于目的蛋白的N端,这时tag可以提供良好表达所必需的信号,帮助提高目的蛋白的表达,缺点是纯化的表达产物中可能会有不完整的目的蛋白,原因是在翻译过程中意外中断的少量
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