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文献和实验蛋白;如果是纯化过程中蛋白易降解,则可以在纯化试剂中加入甘油以及蛋白酶抑制剂,并且确保整个操作在4度完成。 2、如何在E. coli中表达高度毒性的蛋白? 在E. coli中表达高度毒性的蛋白往往是很困难的。毒性基因表达‘泄漏’会杀死宿主菌,尤其在早期的生长或转化后,可以使含有突变的不表达质粒的细菌选择性生长。因此,要表达高毒性的蛋白,需要更高水平的lac 抑制蛋白。推荐同时使用QIAGEN公司的pQE-80L系列表达载体和M15[pREP4]宿主菌。pQE-80L系列表达载体带有lac抑制子基因,宿主
-16、pQE-40,使生成目标多肽与DHFR的融合蛋白;如果是纯化过程中蛋白易降解,则可以在纯化试剂中加入甘油以及蛋白酶抑制剂,并且确保整个操作在4度完成。 2、如何在E. coli中表达高度毒性的蛋白? 在E. coli中表达高度毒性的蛋白往往是很困难的。毒性基因表达‘泄漏’会杀死宿主菌,尤其在早期的生长或转化后,可以使含有突变的不表达质粒的细菌选择性生 长。因此,要表达高毒性的蛋白,需要更高水平的lac 抑制蛋白。推荐同时使用QIAGEN公司的pQE-80L系列表达载体和M15
协同方面的遗传学研究上也有应用。这里,我们详细地描述了以作为表达菌株,Tag 聚合酶作为靶蛋白,用 CSR 来选择新特性聚合酶的实验流程。 2. 材料 ( 1 ) E.coli 抑制菌株 TG1 ( K12、△ [ lac-pro]、supE、thi、hsdD5/F' traD36、proA+B+、lacIq、lacZ△M15)用来扩增质粒和聚合酶的表达。 ( 2 ) 2X TY 培养基(1 L;参考文献 [26]):16 g 胰蛋白胨、10 g 酵母提取物和 5 g 氯
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