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20UG
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文献和实验蛋白,样本稍微放长些时间就悲催了 其次,western blot的过程是有标准化的,但是蛋白上样的量跟你抗体,发光体系的选择也是有一定关系的,我做过一个36KD左右的蛋白在ECL发光时在一样的一抗浓度下,ECL发光用到50ug也就跟奥德赛双色显色系统用20ug一样的效果。你可以尝试从1.0板 15孔 20ug(这应该是最省样本的了吧?)先做起,看内参情况调节上样量,把内参砸漂亮了就差不多了,总之,每个实验都不一定非得要上20ug,我个人的体会。不足之处,不要扔砖头啊 毛毛
染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。方法1、悬浮细胞的染色:将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞(0.5~1×106)用PBS洗2次,加入100ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V(20ug/ml)10ul,室温避光30min,再加入PI(50ug/ml)5ul,避光反应5min后,加入400ul Binding Buffer,立即
, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来。 方法 1 悬浮细胞的染色 将正常培养和诱导凋亡的悬浮细胞(0.5~1×106)用PBS洗2次,加入100ul Binding Buffer和FITC标记的Annexin-V(20ug/ml)10ul,室温避光30min,再加入PI(50ug/ml)5ul,避光反应5min后,加入400ul
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