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文献和实验Intracellular Immunofluorescent Staining for Flow Cytometry
eBioGrB Mouse Langerin (CD207) eBioRMUL.2 Human Nanog hNanog.1 Human PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen) PC10 Mouse Perforin eBioOMAK-D
, 1 mM DTT, 0.5 mM MgCl2, 0.2 mM PMSF (add just before use). Buffer D: 10 mM Tris-Cl, pH 8.0, 0.2 mM CaCl2 , 0.5 mM ATP, 0.1 mM DTT, 100 mM KCl, 0.1 mM PMSF. Buffer G: 1 mM Tris-Cl, pH 8.0, 0.2 mM ATP, 0.2 mM CaCl2 , 0.1 mM DTT, 0.005% NaN3 2. Make
(0.05% Tween-20),室温震荡封闭 1h。 7. 一抗孵育:加入稀释后的一抗 (见表 1),4℃ 过夜孵育。 8. 洗涤:一抗孵育结束后,含有 0.05% Tween-20 的 PBS 洗涤 3 次, 每次 100g 离心 5min。 9. 二抗孵育:加入二抗 (AlexaFluor 555 驴抗兔 1:200、AlexaFluor 488 驴抗小鼠1:200) 及 DAPI (1:1000),室温避光震荡孵育 2h。 10. 洗涤与封片:含有 0.05% Tween-20 的 PBS 洗涤
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