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- 赛默飞（Thermo Fisher）
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- 2025年07月16日
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文献和实验糖，建议进行 Pre-clear；如果使用磁珠，此步可忽略 抗 X 抗体的轻链（25 kD）和重链（50 kD） 更侧重于如何在实验上进行优化（见下文） *注意：总蛋白上样量过多也会造成 非特异性结合，建议上样量为 500 ug-1 mg。上样之前一定要先用 BCA 定个量！定个量！定个量！ pre-clear：上样前先用裂解液过一遍柱子，减少基质本身对蛋白的吸附 Output：在某些 co-IP 实验中，实验人员会把IP后的上清分别进行诱饵蛋白 X 和靶蛋白 Y 的 WB 检测
into eppyincubate 45' 4℃ à Vortex several times duringspin 10 secs 4℃divide sample: ~400 l for IP/ ~ 100 l for WesternIP -- 1° Ab => 4℃ 1 hour rockingif 1° is not rab.à 2° Ab => 4℃ 1 hour rocking (RaM 2l)-- PrA/Seph 4℃ 1 hour rocking 40l-- Spin down 4℃ 1'-- Wash 3X
有适合免疫沉淀IP的GST抗体吗？ 近年来在原核表达体系中，谷胱甘肽S转移酶GST表达纯化系统的应用更为普遍，它的来源是日本血吸虫的25kDa大小的GST蛋白。GST标签系统具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便，以及利于GST抗体制备等特点和优势。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可从细菌裂解液中提取，在不变性的条件下通过亲和层析得到。GST融合蛋白可被位点特异性蛋白酶裂解，从而除去GST蛋白。正是由于以上的优点，商品化的GST融合蛋白表达体系以及GST标签抗体系统至今仍被广泛
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