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文献和实验细胞已死亡破碎,通过淋巴细胞分层液,低速离心予以去除。 4) B细胞的相对纯化:用淋巴细胞分层液500—800r/min离心6—8min,将上述细胞悬液再次纯化;用Hanks液洗1—2次,调整细胞浓度至1X106 —2X106 /mL。 2. 诱生上清IL-4含量的测定 1) 将上述B细胞悬液加入96孔培养板,100~tL/孔,分别加入待测IL-4诱生上清或不同量标准品rlL-4,其浓度为每毫升0.5U、1U、2U、3U、4U、5U、6U,各组均设3复孔。
to 0.05, and zymolyase (100T) to 60 ug/ml. Incubate 1 hour at 37oC. Pellet spheroplasts as above. Resuspend in 10 mls Solution A and pellet again. Combine the suspension of whole cells with the spheroplasts and pellet as above. Resuspend in 10
样品,标准IL-4从100ng/ml稀释到0.1pg/ml(共12个稀释度)。每孔加0.1ml稀释样品,每个稀释度三个复孔,阴性对照孔不加IL-4。 5.在37℃ 5% CO2饱和水汽二氧化碳培养箱中培养细胞48小时。 6.每孔加0.5μCi(18.5kBq)[3H]脱氧胸苷,继续培养18小时。 7.用多头细胞收集器将细胞收集到玻璃纤维滤纸上,液体闪烁计数仪计数细胞摄入的同位素活性,用cpm值对样品稀释倍数作图。比较标准品和待测样品的50%最大cpm值处
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