MO CD69 H1.2F3 PE MAB-100UG-21

细胞内细胞因子的流式细胞仪检测

14圈定单核细胞2、荧光标记的细胞因子抗体R&D提供FITC、PE和APC标记的细胞因子抗体3、溶血素用外周全血检测时需使用溶血素（R&D目录号WL1000用于人或者WL2000用于小鼠；eBioscience目录号00-4333）溶解红细胞4、激活剂① Phorbol 12-Myristate 13 Acetate（PMA）（Alexis，目录号ALX-445-004-M001）DMSO中调节浓度0.1mg/mL分装（20L），－20℃储存。勿反复冻融每次实验用无菌无叠氮钠PBS 1：100稀释

细胞内细胞因子的流式细胞技术检测

(0.5 - 1 ug/ml) 刺激24 小时. 方法4：人的PBMCs或者纯化的CD4+细胞在包被人CD3抗体的培养板中，使用含有重组人的IL-2(10 ng/ml，目录号202-IL-010)和IL-4(10 ng/ml，目录号204-IL-005)的培养基培养两天;细胞洗涤后在含有重组人IL-2和IL-4的培养基中继续培养2天;最后收获细胞，使用PMA(10 ng/ml) 和Ionomycin (1 uM)刺激6小时20mL于Falcon管中，加入100mL激活后的全血(细胞浓度维持在2×106

流式细胞分析分选术

-20oC 冰箱，保存。 2.6 上机样本制备 从-20oC 取出细胞样本(至少已在-20oC 放置4 小时)，离心(300g，5min)收集细 胞，弃上清。1×PBS 清洗两遍，加入100ul 1×PBS，votex 混匀，加入10ulPI(终 浓度100ug/ml)，10ulRnase(终浓度50ug/ml)，置于37oC 水浴锅，避光处理30min。 注：细胞量较多时，PI 及RNase 量应酌量增加。 2.7 上机 在cellquest 环境下，选择FL