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- 赛默飞（Thermo Fisher）
- 7TM0366C
- 2025年07月16日
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文献和实验染色体步移是一种常用的克隆已知基因旁侧序列的技术。基因的表达调控已成为分子生物学研究热点之一，启动子是基因表达调控的重要顺式元件，启动子的克隆对于研究基因表达调控，构建基因工程载体，表达目的蛋白有着重要的意义。启动子克隆的方法很多，常见的扩增启动子或已知序列末端旁侧的核苷酸序列的方法有两种：方法一 酶切加接头1 大量提取基因组 DNA（1）取样品 100 mg，置于 1.5 mL EP 管中，加入 500 uL 裂解液（56 °C），用研磨棒充分匀浆。（2）加入 350 uL 苯酚（pH
PCR引物设计和优化(PCR PRIMER DESIGN AND REACTION OPTIMISATION)
for calculation of the Tm isTm = 4（G + C） + 2（A + T）℃.Thus, the annealing temperature chosen for a PCR depends directly on length and composition of the primer（s）。 One should aim at using an annealing temperature （Ta） about 5℃ below the lowest Tm of ther pair
or cosmid DNA of interest into a 12 X 75 mm Falcon tube containing 2 ml of LB media supplemented with the appropriate antibiotic (typically ampicillin at 100 ug/ml) and incubate at 37deg C 8-10 hours with shaking at 250 rpm. Transfer the culture
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