组织细胞裂解液（RIPA、IP、WIP、SDN、NP-40)

产品简介

RIPA组织细胞裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。 配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。用于动物、植物的细胞或组织样品，也可以用于真菌或细菌样品。RIPA组织细胞裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation，IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。

Ø RIPA组织细胞裂解液(强)的主要成份为50mM Tris (pH 7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。

Ø 用RIPA组织细胞裂解液(强)裂解得到的蛋白样品，可以用赛驰生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

运输和储存方法

-20℃保存，一年有效。

使用说明

1.   取出 RIPA组织细胞裂解液(强)，待融化后颠倒混匀数次，适量分装冻存。在使用前取出 PMSF溶液（100mM），按比例加入（使其最终浓度为 1mM）混匀，或者根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物，立即使用。

2. 培养细胞样品：

1-1．贴壁细胞，去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗 2-3 遍(如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗)。按 6 孔板每孔加入 100-200 微升的比例加入 RIPA组织细胞裂解液(强)。用枪吹打数下，使 RIPA组织细胞裂解液(强)和细胞充分接触。通常 RIPA组织细胞裂解液接触细胞数秒后细胞就会被裂解。植物细胞宜在冰上裂解2-10min。

1-1．悬浮细胞，收集培养细胞，离心去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗 2-3 遍(如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗)，用手指把细胞用力弹散，按 6 孔板每孔细胞加入 100-200 微升的比例加入 RIPA组织细胞裂解液(强)。

1-2．如果细胞数量较大，应按 50-100 万细胞/管分装或根据细胞数量按比例增加 RIPA组织细胞裂解液(强)。用手指轻弹管底以促进 RIPA组织细胞裂解液(强)和细胞充分接触，裂解完全时应无明显的细胞颗粒。

1-3．裂解物经 10,000-14,000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

1-4．裂解液用量说明：通常 6 孔板每孔细胞加入 100 微升裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 150 微升或 200 微升。

1. 组织样品： 

2-1．取 Ep 管，分别称重标记，把组织剪切成小块装入 Ep 管中称重。按每 20 毫克组织加100-200微升的比例加入 RIPA组织细胞裂解液(强) (如裂解不完全，可以适当增加 RIPA组织细胞裂解液(强)的用量；如需要的蛋白样品浓度较高，可以适当减少 RIPA组织细胞裂解液的用量)。用手握式电动组织细胞匀浆器匀浆约 1 分钟或直至充分裂解。

2-2．10,000-14,000g 离心 3-5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

2-3．如果组织样品本身非常细小，如淋巴细胞，可直接加入 RIPA组织细胞裂解液(强)裂解，通过振荡以使样品裂解完全。

注意事项

1. 为获得最佳的实验效果，可适当分装使用，以尽量避免反复冻融。

2. PMSF溶液（100mM）应现用现加。

3. 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

4. 蛋白酶抑制剂均有较高的毒性，一旦直接接触，请立即用流水冲洗，再向医疗保健机构咨询。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品.