Rat IFN-γ ELISA Kit，Valukine™

Rat IFN-γ ELISA Kit，Valukine™

产品信息及操作手册
大鼠 IFN-γ ValukineTM ELISA 试剂盒
目录号：VAL905
适用于定量检测天然和重组大鼠γ干扰素（IFN-γ）的含量
科研专用，不可用于临床诊断

有效期详见试剂盒包装标签
Novus 试剂盒确保在你收货日期 3 个月内有效

I. 背景
γ干扰素（IFN-γ，也称为II型干扰素）是一种重要的免疫调节细胞因子，最初发现
是通过其抗病毒活性（1，2）。它通过发挥抗病毒、抗增殖和免疫调节活性在宿主防御
中发挥关键作用（3，4）。在多种细胞上，IFN-γ诱导细胞因子的产生，并上调各种膜
蛋白的表达，包括I类和II类MHC抗原、Fc受体、白细胞粘附分子和B7家族抗原。γ干扰
素是巨噬细胞效应功能的有效激活剂。它通过调节B细胞来控制免疫球蛋白的合成、分
类转换和分泌。IFN-γ还通过抑制Th2分化和刺激Th1发育来影响辅助T细胞表型发育（3，
4）。IFN-γ在炎症性疾病（如自身免疫和动脉粥样硬化）的进展中起着核心作用（5，6）。
生物活性IFN-γ由非共价连接的20-25 kDa可变糖基化亚基的同源二聚体组成（7）。
成熟大鼠IFN-γ与小鼠IFN-γ具有86%的氨基酸（aa）序列一致性，与牛、犬、棉鼠、马、
猫、人、猪和恒河猴IFN-γ的氨基酸序列一致性为37%-45%。IFN-γ二聚体结合跨膜IFN-γ
RI（α亚基），然后与跨膜IFN-γ RII（β亚基）相互作用，形成两个α和两个β亚基组成
的功能性受体复合物（8，9）。在受体复合物中包含的IFN-γ RII可提高配体结合亲和力
以及信号转导效率（9，10）。尽管α亚基在许多细胞类型上组成型表达，但β亚基的细
胞调节与IFN-γ应答状态相关，并受到严格调节（8）。
IFN-γ可由多种细胞在炎症条件下产生，包括树突状表皮/γδ T细胞（11）、角质细
胞（12）、外周血γδ T细胞（13）、肥大细胞（14）、神经元（15）、CD8+ T细胞（16）、
巨噬细胞（17）、B细胞（18）、中性粒细胞（19）、NK细胞（20）和CD4+ T细胞（21）。

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II. 概述
A. 检测原理
本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗大鼠IFN-γ抗体包被于微孔板上，样品和标准品
中的大鼠IFN-γ会与固定在板上的抗体结合，游离的成分被洗去；接着加入生物素化的
抗大鼠IFN-γ检测抗体进行孵育，洗涤去除未结合的物质后，加入链霉亲和素标记的辣
根过氧化物酶（streptavidin-HRP）孵育。洗涤去除未结合的试剂后，加入TMB底物溶
液（显色剂）。溶液颜色与结合的目标蛋白成正比；加入终止液；用酶标仪测定吸光度。
B. 检测局限
 仅供科研使用，不可用于体外诊断；
 该试剂盒适用于细胞培养上清和大鼠血清；
 请在试剂盒有效期内使用；
 不同试剂盒及不同批号试剂盒的组分不能混用；
 样本值若大于标准曲线的最高值，应将样本用标准品稀释液（1×）稀释后重新检测；
 检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗
板技术、反应时间或温度、试剂盒的储存等。

B. 回收率
在细胞培养上清样本中掺入检测范围内不同水平的大鼠IFN-γ，测定其回收率。回收率
范围在91.9-97.4%，平均回收率在94.4%。
在大鼠血清样本中掺入检测范围内不同水平的大鼠IFN-γ，测定其回收率。回收率范围
在89.1-102.9%，平均回收率在93.0%。
C. 灵敏度
大鼠IFN-γ的最低可测剂量（MDD）一般小于8.55 pg/mL。
MDD是根据20个重复的零标准品孔的吸光度值的平均值加两倍标准差计算得到的相对
应浓度。
D. 校正
此ELISA试剂盒经由R&D Systems大肠杆菌表达的高纯度重组大鼠IFN-γ蛋白所校正。
E. 线性
在不同类型样本中掺入高浓度的大鼠IFN-γ，然后用标准品稀释液（1×）将样本稀释到
检测范围内，测定其线性。

G. 特异性
此ELISA法可检测天然及重组大鼠IFN-γ蛋白。将以下因子用标准品稀释液（1×）配制
成50 ng/mL的浓度来检测与大鼠IFN-γ的交叉反应。将50 ng/mL的干扰因子掺入中间范
围的重组大鼠IFN-γ对照品中，来检测对大鼠IFN-γ的干扰。下表因子没有观察到明显
的交叉反应或干扰。
Recombinant human: Recombinant porcine:
IFN-γ IFN-γ
浓度50 ng/mL的重组小鼠IFN-γ样本，在此试剂盒中检测值为690 pg/mL。（1.4%交叉率）