牛黄胆酸钠逆胰胆管灌注诱导重症胰腺炎模型

一、模型背景与机制

理论基础

牛黄胆酸钠（Taurocholic acid Sodium Salt）诱导的SAP模型是模拟胆汁反流性胰腺炎的经典方法，其机制与人类胆源性胰腺炎高度相似：

1. 胆汁反流模拟：
   • 逆行胰胆管注射牛黄胆酸钠直接模拟胆汁逆流，激活胰酶（如胰蛋白酶原），导致胰腺自我消化。
2. 炎症级联反应：
   • 牛黄胆酸钠通过激活NF-κB通路，促进TNF-α、IL-6等促炎因子释放，引发全身炎症反应综合征（SIRS）。
3. 细胞损伤机制：
   • 诱导胰腺腺泡细胞焦亡（Pyroptosis），通过Caspase-1依赖性途径升高焦孔素D（GSDMD）表达，加剧组织坏死。

关键引用：

• "胆汁反流导致胰酶异常激活是模型的核心机制" 。
• "牛黄胆酸钠通过NF-κB通路驱动全身炎症反应" 。

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二、动物模型操作流程（以大鼠为例）

实验动物与准备

• 动物品系：雄性SD大鼠（体重180–350g），禁食8–12小时，自由饮水。
• 试剂配制：5%牛黄胆酸钠生理盐水溶液（需无菌过滤）。

手术步骤

1. 麻醉与开腹：
   • 1%戊ba比妥钠（5 mL/kg）腹腔注射麻醉，上腹部正中切口（5 cm）暴露十二指肠。
2. 胰胆管插管：
   • 定位十二指肠降部，用细针（如26G）经肠壁穿刺逆行插入胰胆管，夹闭胆总管近肝端。
3. 药物灌注：
   • 缓慢注射5%牛黄胆酸钠（1 mL/kg，流速0.1 mL/min），对照组注射等量生理盐水。
4. 术后处理：
   • 拔针后按压穿刺点防渗漏，关腹，大鼠置于保温垫复苏。

时间节点与观察

时间点	病理变化	关键指标
3–6 h	腺泡细胞空泡变性，炎症细胞浸润	血清淀粉酶↑、TNF-α↑
12 h	胰腺大片坏死，出血，腹水形成	病理评分峰值，死亡率升高
24–48 h	多器官衰竭（肺、肝、肾）	生存率仅10–30%

注意事项：

• 剂量敏感性：>1.2 mL/kg可致24小时死亡率达70%，需严格控制流速。
• 操作技巧：穿刺深度不足易导致药物外渗，过深可能损伤胰管。

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三、病理特征与多器官损伤

胰腺病变

• 大体观察：胰腺水肿、出血、黑色坏死灶，腹水量>5 mL（12 h）。
• 组织学特征（HE染色）：
  • 腺泡细胞凝固性坏死，炎性细胞弥漫浸润，小叶结构破坏。

胰腺外器官损伤

器官	病理表现	生化标志物
肺	肺泡间隔增厚，炎性细胞浸润	乳酸脱氢酶（LDH）↑
肝	肝细胞脂肪变性，灶性坏死	谷丙转氨酶（ALT）↑
肾	肾小管上皮细胞水肿	血肌酐（Cr）↑
心	心肌纤维断裂，间质水肿	肌酸激酶（CK）↑

关键引用：

• "SAP模型12小时出现胰腺大片坏死和腹水" 。
• "多器官损伤是模型高死亡率的主因" 。

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四、模型验证标准与评估方法

核心评价指标

1. 生化检测：

   • 血清淀粉酶：>正常值3倍（如大鼠>1500 U/L）。
   • 炎症因子：TNF-α、IL-6显著升高（ELISA法）。

2. 病理评分系统：

   指标	0分（正常）	1分（轻度）	2分（中度）	3分（重度）
   水肿	无	小叶间水肿	小叶内水肿	广泛水肿
   炎症浸润	无	血管周围	小叶内	弥漫性
   坏死	无	<15%	15–35%	>35%

   • 总分≥7分可判定为SAP。

3. 生存率分析：

   • 48小时生存率<30%表明模型成功。