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HPLC入门问题FAQ

保护柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查。将柱子的进出口反过来接在仪器上，用 10 倍柱体积的流动相冲洗柱子，(此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动性 )。这时，如果柱压仍不下降，再检查；更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明你的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE 提供

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9］用RP-HPLC从人体胎盘中分离出40S核糖体蛋白。每一色谱组分都用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DPAGE) N-端测序进行鉴别。N-端封闭的蛋白用内蛋白酶赖氨酸-C切割，然后对合适的肽段测序。用此法可对HPLC洗脱出的40S人体核糖体亚单元中所有蛋白进行鉴定。 　　ESI-MS用于短肽链高灵敏度测序，由于技术的困难，该法不能分析从凝胶中离析的蛋白质。Wilm等［10］介绍了一种从PAGE中离析的蛋白质进行测序的简便有效的方法纳克级电喷雾***质谱法。用此方法低至5 ng的蛋白都可被测序

【转帖】蛋白质组学-常见问题

。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题， SGE 提供的 Rheodyne 7315 型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。 4 ．液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么? 筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。 存在干扰峰，解决办法为使用较长柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子。 双向电泳篇 1. 重泡胀后的胶可以不用转移到另一个电泳槽，直接跑 2D 的一向吗？ 一般情况下是可以的。但当上