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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
武汉恩玑生命科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
20T/50T
| 规格: | 20T | 产品价格: | ¥1600.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 50T | 产品价格: | ¥3200.0 |
| 检测原理 |
细胞发生凋亡时, 会激活一些 DNA 内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组 DNA,产生 180 bp-200 bp 的 DNA 片段,表现为琼脂糖凝胶电泳中呈现的特异的梯状 Ladder 图谱。基因组 DNA 双链或单链断裂时会出现产生大量的粘性 3'-OH 末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的催化作用下,与 488/Cy-dUTP 结合,从而通过荧光显微镜或流式细胞仪直接进行凋亡细胞的检测,这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(Terminal - deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有 DNA 的断裂,因而没有 3'-OH 形成,很少能够被染色。Tunel 法可以对完整的单个凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色,能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征,可检测出极少量的凋亡细胞,因而在细胞凋亡的研究中广泛采用。 |
| 检测方法 |
荧光法 |
| 样本类型 |
细胞 |
| 检测仪器 |
荧光显微镜,流式细胞仪 |
| 荧光 |
Fluorescein 488 |
| Ex/Em |
490/515 |
| 保存温度 |
-20℃保存,组分 A 需避光,避免反复冻融。 |
| 有效期 |
有效期见外包装。 |
| 运输条件 |
冰袋 |
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文献和实验【求助】Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒的使用
mmsong1987 我买了Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒,想研究某种材料的细胞毒性,看其是否会诱导细胞凋亡。之前做过MTT之类的检测,结果显示材料基本无毒性。 由于条件限制(流式细胞仪在我们学校另一个校区)不能及时进行检测,前两天进行了一次实验,是将细胞收集后拿到测试地点再进行的荧光染色处理,检测结果显示阴性对照组没有加材料处理的细胞也多处于凋亡状态,个人猜测可能跟细胞在路上耽误的时间有关(悬浮在Annexin V结合液中
Enhanced Substrate Set*DAB 金属增强底物* 或 POD 底物替代物 光镜镜检封固剂 信号转换 section3.4 湿盒 Parafilm 石蜡封 口膜或盖片 产品概述: 特异性:TUNEL 反应优先标记凋亡产生的 DNA 链断裂,从而辨别凋亡与坏死、以及由抑 制细胞生长的药物或放射线产生的 primary DNA 链断裂 实验干扰:假阴性:在某些型式的凋亡细胞中 DNA 链断裂可能缺失或不完全。空间位阻, 如细胞外元件可能阻止 TdT 到达
膜的外侧。Annexin-V是一种35-36KD的钙粒子依赖的磷脂结合蛋白,它对PS具有较高的亲和力。细胞凋亡时,可以和外翻的PS结合,从而可以检测凋亡的细胞。发生死亡的细胞其细胞膜上的PS也外翻,因而也会阳性。因此,常用的凋亡试剂盒除了采用Annexin-V标记之外,还会加一种DNA染料,常用的有PI和7-AAD,由于死亡的细胞膜通透性增高,染料可以进入细胞内和DNA结合,从而可以发荧光,区分出死细胞。下图给出的是在使用FAS单抗诱导前后的检测结果,横坐标是Annexin-V FITC,纵坐标是PI
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