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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 规格:
500ml
| 名称 | 体积 | 浓度 | 保存条件 |
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原代平滑肌细胞基础培养基
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500ml |
1×
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4℃、避光
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原代平滑肌细胞培养添加剂
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5ml |
100×
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-20℃、避光
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胎牛血清(FBS)
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50ml |
终浓度 10%
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-20℃、避光
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双抗(青霉素/链霉素,P/S)
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5ml |
100×
|
-20℃、避光
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注意事项:
本产品仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。
拆包 & 存储
1. 请立即检查包装袋是否有破损或漏液
2. 请立即将细胞培养瓶从包装盒中取出,并按照说明书操作步骤进行培养传代
注意:如为冻存管,请收到后立即解冻培养
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文献和实验实验步骤(一)、取SD 大鼠一只,实验时断椎处死。(二)、在无菌条件下快速自肛门上2 cm 取结肠10 cm 左右,生理盐水中反复灌肠冲洗。(三)、移入含300 U/ml青霉素、300 U/ml 链霉素的HepesRinger缓冲液中浸泡,肠段内外各15 min。(四)、将经抗生素浸泡过的肠段移入含Hepes Ringer缓冲液的塑料培养板中(培养板预先铺上705胶),在体视显微镜下沿肠系膜对侧纵行切开肠段,皮内针固定好四角,仔细地刮除粘膜层,翻转至外侧,小心地撕去肠系膜,再仔细地刮去浆膜
、不要加入DMEM为主要成分的培养液(否则胰蛋白酶失活)12、转移入培养瓶中13、4度下过夜孵育。14、加0.25%胰蛋白酶,36.5度振荡消化15~30min,弃上清。15、200目(74um)不锈钢网过滤。(可省),转移入离心管,***吹打后待可见物沉淀,吸尽沉淀(避免组织块培养法)16、离心1000转/min,10分钟 离心半径13cm?弃上清18、加培养液至10ml(ok)17、转移入培养瓶中19、CO2恒温箱中培养20、12h后收集未贴壁细胞并计数
较简单;但容易产生杂质如成纤维细胞等,成纤维细胞生长快,故培养之细胞质量较差;培养的大多数细胞无收缩性;且原代细胞的获得需3~4周,获得大量平滑肌细胞耗时长(17)。既往酶消化法较组织块法复杂、精细;适宜的酶浓度和培养时间的确定较为困难;然而在较短时间内可获得大量的平滑肌细胞,1996年有学者报道(Chambers(18)等)酶消化法纯度为70%。可见一种快速、高效、高纯度的酶消化法培养膀胱平滑肌的方法显得尤为重要。 本实验研究两只兔所有标本均获成功。倒置显微镜观察平滑肌细胞24小时均可见膀胱平滑肌细胞











