- ￥700
- 烜雅生物
- XY-ZL0060
- 国产
- 2025年12月18日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
150
- 英文名：
pTRE3G
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
质粒干粉
英文名称：pTRE3G
形式：质粒干粉
参考用途：宿主：哺乳动物 用途：蛋白表达
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)
生长条件：LB +氨苄青霉素，37℃（克隆菌株DH5α，3431bp ,启动子:TRE3G 复制子:pUC ）
存储条件：2-8℃
安全等级：0
操作步骤 ：
1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min；
2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10µl 混匀，冰上放置 30min；
3.热激导入： 42℃静置 90s；
4.收缩膜孔： 冰浴 2min；
5.修复培养： 毎管加 800µl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min；
6.筛选培养： 将适当体积（100 µl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。
7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。
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文献和实验使用Clontech公司的In-Fusion PCR Cloning Kit快两年了，在此谈谈心得。早期的In-Fusion PCR Cloning Kit是干粉，现在已经发展成为试剂盒，两种我都用过。此方法最大的优点就是不用考虑插入片段的正反性，只要链接成功就是阳性克隆。但是有时候链接效率低，比较不容易得到阳性克隆，因为我没有使用同类的其他链接方法，所以也不知道两者比较起来如何，但是据我的老师说这个方法效率高。在整个过程中，我觉得应该注意的有以下几点：1 载体的酶切效率。此法需要使用两种
培养基） 沙氏葡萄糖液体培养基 Sabouraud Dextrose Broth 用于念珠菌的增菌。 (2010版中国药典) 021095 250g（干粉） 沙氏葡萄糖液体培养基 Sabouraud Dextrose Broth 用于念珠菌的增菌。 (2015版中国药典) 021096
酶活性；2. 10×CIP 缓冲液和 1U CIP，混合后，37 ℃ 孵育 30～60 min，然后 75 ℃ 加热 15 min 灭活 CIP 活性；3. 琼脂糖凝胶电泳分离并纯化目的 DNA 片段用于连接反应。（二）连接反应【实验试剂与器材】1. T4 DNA 连接酶2. 10×T4 连接酶缓冲液【实验方法与步骤】反应体系：质粒 DNA (0.5(g/? 滋 l) 2? 滋 lDNA 插入片段 (300ng/? 滋 l) 5? 滋 l10× 连接缓冲液 1? 滋 lT4 DNA 连接酶 1? 滋 l加水
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