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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
180
- 英文名:
pET28a-VP1
- 保质期:
2年
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件:
2-8℃
- 规格:
质粒干粉
英文名称:pET28a-VP1
形式:质粒干粉
参考用途:蛋白表达
培养基:酵母膏:5.0,蛋白胨:10.0,NaCl:10.0,pH:7.0(25℃)
生长条件:LB +卡那霉素,37℃(克隆菌株DH5α)
存储条件:2-8℃
安全等级:0
操作步骤:
1.溶解: 收到质粒干粉后,请加入 20μl 无菌水至管底,溶解质粒,室温静置 1min;
2.混合(吸附质粒): 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10μl 混匀,冰上放置 30min;
3.热激导入: 42℃静置 90s;
4.收缩膜孔: 冰浴 2min;
5.修复培养: 毎管加 800μl LB 液体培养基,37 ℃培养 1h 150 r/min;
6.筛选培养: 将适当体积(100 μl)的复苏细胞,涂布在相应抗性的 LB 平板上,正置平皿 30min(琼脂面务必干燥后), 倒置培养 12-16h,出现菌落。
7.提取: 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中,震荡培养 12-16h,根据试验需要提取质粒。
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文献和实验查、基因筛选及图位克隆有益基因的最好材料,也是永久保存基因资源的最好方法之一。 至于作用就太多了,你自己google一下,发现的是你好多做不了,而不是不知道怎么做? huangyuan62 楼主,请问能交换你的BAC质粒吗?pBACe3.6,pBeloBAC11等都可以。 本人有以下质粒和菌种,可全部用于交换 pET28a,pET32a,pETDsb,pETGST,pETTrx,pTrc—CKS, pGEX4T
蛋白。由于IPTG不会被宿主菌利用,因此向培养液中加入少量的IPTG 就能lacUV5强启动子产生持久的诱导作用。 2.材料与方法 1).Taq DNA聚合酶表达载体构建 Nde1,Sal1双酶切通过pcr引进此双酶切位点taq酶基因,经过T4连接酶连接,将长度为2496bp的 taq聚合酶基因,插入同样双酶切的PET28a载体中。 2).工程菌的转化 通过热击转化的方法,将连接产物转化BL21(DE3)表达菌株,通过菌落pcr,提取质粒酶切鉴定确认taq酶基因已经确实插入PET28a载体,送
本人整理了论坛上关于战友所求助的各种质粒载体的图谱,后面所跟着的网站都是含有前面名称载体的详细图谱,希望对大家能有帮助! 质粒pGEM-4Z载体图谱 http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/5198013_0.html pGEX-4T-2载体图谱:http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/4211077_0.html pGEX-4T-1载体图谱:http://www.dxy.cn/bbs
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