- ￥900
- 烜雅生物
- XY-ZL0016
- 国产
- 2025年12月18日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
65
- 英文名：
PESC-LEU
- 保质期：
２年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
质粒干粉
英文名称：PESC-LEU
形式：质粒干粉
参考用途：筛选标记: Leu2 ，用半乳糖诱导，可以同时使两个基因在酿酒酵母中表达。
培养基：酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0(25℃)
生长条件：LB +氨苄青霉素，37℃（克隆菌株DH5α，7758bp）
存储条件：2-8℃
安全等级：0
操作步骤：
1.溶解： 收到质粒干粉后，请加入 20μl 无菌水至管底，溶解质粒，室温静置 1min；
2.混合（吸附质粒）： 200μl 感受态细胞 + 质粒 DNA 5~10µl 混匀，冰上放置 30min；
3.热激导入： 42℃静置 90s；
4.收缩膜孔： 冰浴 2min；
5.修复培养： 毎管加 800µl LB 液体培养基，37 ℃培养 1h 150 r/min；
6.筛选培养： 将适当体积（100 µl）的复苏细胞，涂布在相应抗性的 LB 平板上，正置平皿 30min（琼脂面务必干燥后）， 倒置培养 12-16h，出现菌落。
7.提取： 挑取单克隆菌落至相应抗性 LB 液体培养基中，震荡培养 12-16h，根据试验需要提取质粒。
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文献和实验μl +180μl NaCl(0.9％) 1:100000 1:1000; 1:10000；1:100000 三种浓度各取100μl 涂布SD/-Trp/-Leu 平板 20) 转库效率的计算：对生长在SD/-Trp/-Leu 平板上的克隆计数，挑选克隆数在 30-300 之间稀释度计算转库效率 转库效率计算实例： .. 在1：10000 转库效率计数平板上长出100 个克隆(稀释度=0.0001) .. 总悬浮体积= 5ml .. 文库质粒用量=100μg 转库
组中还整合有另一个报告基因Leu，它与LacZ报告基因具有相同的操纵子-LexA，但两者启动子不同。 根据双杂交系统的原理，如果某一复合物同时具有DNA-BD和AD的活性，即可激活报告基因的转录和表达。分别将待测蛋白X、Y的编码序列插入pLexA质粒载体和pB42AD质粒载体的多克隆位点中，然后共同转入含有报告基因的酵母菌株，如果蛋白X与Y能相互作用，则启动报告基因的转录和表达，通过检测报告基因的表达情况，就可以间接反映蛋白X、Y是否具有相互作用以及作用的强弱。 如果将蛋白
，大量回收质粒DNA，从而达到大量扩增外源DNA的目的。 （二）真核生物中的质粒 真核生物中的酵母是国内外广泛研究的载体-受体系统之一。这是一个共价闭环DNA分子（cccDNA），平均周长2μm，所以称为2μmDNA质粒，在每个酵母细胞里约有100个拷贝。已有人把2μmDNA同pBR322DNA构建成双功能质粒，可在大肠杆菌和酵母菌中复制。这种质粒带有啤酒酵母的二个基因（his3和Leu2），所以很容易用酵母的营养缺陷型菌株来选出。 二、噬菌体和病毒载体 噬菌体λ是最主要的一种载体
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