CRISPR guide RNA体外转录试剂盒SG-RNA-

如何检测 CRISPR 的脱靶效应

在细胞内通过核酸酶切割产生双链断裂后，以非同源性末端接合 (Non-homologous endjoining, NHEJ) 的方法，引入一种短双链寡核苷酸来标记 CRISPR-Cas 诱导的脱靶断裂，高通量测序找到脱靶位置 [5]。该方法能很好的模拟细胞内脱靶现象，且能找到非预测范围内的脱靶位点，是一种较为可靠的方法。GUIDE-Seq 方法的流程示意图 [5]2、DISCOVER-Seq最近加州大学伯克利分校和阿斯利康公司的研究人员开发出一种利用 DNA 修复因子结合染色质免疫共沉淀和高通量测序

张峰手稿：基因工程技术之CRISPR-Cas9

and homologous recombination. These tools provide researchers with new instruments that accelerateboth forward and reverse genetics efforts. Key words Genome engineering , Cas9 , CRISPR , CRISPR-Cas9 , PAM , Guide RNA , sgRNA , DNA cleavage , Mutagenesis

CRISPR-Cas9 基因敲除 sgRNA 设计

12417 - 12498，一共 82 bp3. 在 Sequence 中查看，复制一整个 segment 的碱基序列如下segment 碱基序列atggccatctacaagcagtcacagcacatgacggaggttgtgaggcgctgcccccaccatgagcgctgctcagatagcgatgStep3 设计 sgRNA首先，先附上鼎鼎大名的张峰实验室提供的网页https://zlab.bio/guide-design-resources1. 打开网页，选择网页工具--博德研究