CRISPR Cas13a DNA-检测试剂盒 -2D-L-

搞定 CRISPR/Cas9 系统操作

CRISPR/Cas9 是一种强大的基因组编辑工具，今天我们介绍 CRISPR/Cas9 系统操作。以下操作说明是基于作者冰糖个人实验室操作，仅供参考。 质粒介绍我们使用的是 Feng Zhang 实验室的系统的 pX330 质粒，如下图所示： 酶切系统 37 ℃, 3 hr；Run 1% gel，回收。Elute 到 50 mL H2O。我们利用 BbsI 消化载体形成粘末端，以利于下游 oligo 退火产物的连接；酶切时请充分，且绝对不能加 CIP 处理

CRISPR

CRISPR RNA-干扰目标 DNA 片段。 在获得阶段，从外源性 DNA 获得新的间隔片段，并插入到 CRISPR 基因座的末端。然后 RNA 前体从 CRISPR 基因座上转录出来并加工成成熟的 crRNAs(CRISPR-RNAs)，然后被一个或多个 Cas9 蛋白结合，形成核糖核蛋白靶向复合物，包含有一个引导序列。最终，Cas 蛋白会把与 crRNA 互补的序列切割降解。 CRISPR-Cas 免疫系统又被分为三种不同类型，又根据 cas 基因的发展史，分为数目可观的亚型。Ⅰ

CRISPR-Cas9 技术敲除酵母菌 ADE1 基因

选育新方法。而 CRISPR-Cas9 技术的出现，更是极大推动了微生物基因组编辑准确性和效率的提高。【背景】泓迅科技利用 CRISPR-Cas9 技术编辑酵母菌中的一个 920bp 的 ADE1 基因。ADE1 是腺嘌呤合成相关基因，如果 ADE1 失活，则细胞将会积累红色色素，呈现红色菌落。【方法】1、质粒构建2、sgRNA 活性检测3、挑选活性较高的 sgRNA 进行基因组定点编辑4、利用基因功能变化、表性变化和测序等方法检测基因定点修饰结果。【结论】1、从颜色表型变化得知，酵母菌落变成红色菌落，可知 ADE