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- 2025年07月15日
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产品货号：XF-SZ0114
产品规格：避光 20片
免疫组化（IHC）是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究。
免疫组化主要涉及抗体实验结果的描述与分析，图片的确定与选取，相关数据的提供，上述工作是免疫组化工作的重点内容，只有严格的实验设计，标准的实验操作，专业化的结果分析才能更好的满足客户的要求。
一、免疫组化技术的基本原理
应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位的定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。
众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体(第一抗体)作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶(常用辣根过氧化物酶)或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的，因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来(常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒)。
通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。
二、免疫组织化学染色方法
1、按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。
2、按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法);与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。
3、按结合方式可分为抗原—抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)法和亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等，其中SP法是最常用的方法。
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文献和实验PBST， 在摇床上缓慢摇动洗涤5 min，共洗涤3次。 5. 荧光二抗孵育 用吸水纸吸尽洗涤液后滴加稀释好的荧光二抗，湿盒中孵育1h后，回收二抗，接着用PBST洗3次，每次5 min；由于荧光容易淬灭，故从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都要避光。 6. 复染核（定位的关键） 在玻片上滴加DAPI，并注意避光孵育5min，对标本进行染核，然后用PBST洗3次，每次5min，洗去多余的DAPI。 7. 封片 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观察
间接法免疫荧光组织化学染色步骤 1．检测抗原法以单层细胞培养标本为例介绍此法的染色步骤： (1)取出细胞贴附生长的小盖片，用预热的PBS冲洗2次； (2)4％多聚甲醛(或冷丙酮)固定5～10分钟，晾干； (3)0．01MPBS(pH 7．4)漂洗3次，每次5分钟。 (4)0．3％Triton X-100孵育，室温20分钟，PBS漂洗2次(细胞膜抗原可省略此步骤)； (5)非免疫血清(或15％小牛血清)孵育，室温10分钟； (6)滴加特异性一抗(如小鼠
20) 孵育细胞 30 分钟，封闭抗体的非特异性结合（可替代的封闭液包括 1% 明胶或来源于产生二抗的物种的 10% 血清：查看抗体数据表了解相关建议）。2. 室温下，用稀释抗体（溶于 1% BSA 的 PBST 中）在湿盒中孵育细胞 1 小时，或 4 ℃ 过夜孵育。3. 倒出溶液，用 PBS 洗涤细胞 3 次，每次 5 分钟。4. 室温下，用二抗（溶于 1% BSA 中）避光孵育细胞 1 小时。5. 倒出二抗溶液，用 PBS 避光洗涤细胞 3 次，每次 5 分钟。多色染色（可选步骤）要检测同一
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