MCAO大鼠模型构建

一、模型原理

通过手术暂时性或永久性阻塞大鼠大脑中动脉（MCA），导致其供血区（皮层和纹状体为主）缺血，模拟临床脑梗死。

二、实验准备

1. 动物选择
   • 常用SD或Wistar大鼠（体重250-300g），雄性为主（避免雌性激素干扰）。
   • 术前禁食12小时（自由饮水）。
2. 主要器材与试剂
   • 手术器械：显微器械、电凝器、缝合线、拉钩等。
   • 栓塞线栓：直径0.22-0.28mm的尼龙线（头端硅胶涂层，提高阻塞效果）。
   • 麻醉剂：异氟烷（推荐）或水合氯醛/戊巴bi妥钠。
   • 其他：体温维持垫、激光多普勒血流仪（监测脑血流）、术后保温箱。

三、手术步骤（线栓法）

1. 麻醉与固定

• 吸入异氟烷（诱导4%，维持1.5-2%）或腹腔注射麻醉。
• 仰卧位固定，剃除颈部毛发，消毒。

2. 颈总动脉（CCA）暴露

• 颈部正中切口，分离肌肉暴露左侧CCA、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA）。
• 结扎ECA远端及CCA近端，暂时夹闭ICA。

3. 插入线栓

• 在ECA剪小口，插入线栓（头端涂硅胶），经ICA分叉处进入颅内。
• 推进至大脑中动脉（深度约18-22mm，阻力感提示到达MCA起始部）。
• 关键点：线栓插入深度需根据大鼠体重调整（通常为18mm+体重×0.1mm）。

4. 缺血与再灌注

• 永久性MCAO：线栓保留至实验终点。
• 短暂性MCAO：阻塞一定时间（如60分钟）后缓慢撤出线栓实现再灌注。

5. 缝合与复苏

• 缝合皮肤，保温复苏（避免低体温影响结果）。
• 术后单独饲养，观察神经症状。

四、模型验证

1. 神经功能评分（术后24小时）
   • 采用Longa评分：
     0分：无异常；1分：对侧前肢屈曲；2分：转圈；3分：倾倒；4分：意识丧失。
2. 脑血流监测
   • 激光多普勒仪确认阻塞后血流下降≥70%。
3. TTC染色（梗死体积评估）
   • 取脑切片，2% TTC染色（正常组织红染，梗死区苍白）。
4. 病理检查
   • HE染色或免疫组化观察神经元坏死、胶质增生等。

五、注意事项

1. 手术关键
   • 避免损伤迷走神经和血管。
   • 线栓插入角度需平行于ICA走向，防止穿破血管。
2. 死亡率控制
   • 永久性MCAO死亡率较高（24小时内约20-30%），可优化术后护理（如补充葡萄糖盐水）。
3. 变异因素
   • 大鼠品系、线栓直径、阻塞时间均影响结果，需预实验确定条件。
4. 伦理与替代
   • 遵循动物福利原则，必要时采用体外模型（如氧糖剥夺细胞模型）辅助。

六、常见问题与解决

• 无梗死灶：线栓位置不当（需解剖确认MCA变异）。
• 蛛网膜下腔出血：线栓插入过深或暴li操作。
• 呼吸骤停：麻醉过深或迷走神经损伤。