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产品火锅:XF-SC0379
产品规格:套
技术服务范围:
1、RT-PCR实验技术服务,QPCR(荧光定量PCR)检测服务
2、Western-blot实验服务
3、免疫组化实验服务
4、放免检测服务
5、ELISA试剂盒检测服务
6、HE染色/特殊染色/技术服务
7、免疫沉淀检测服务
8、常规病理实验检测服务
9、生化实验检测服务
10、整体实验外包服务
专业的产品、合理的价格、完善的服务
主营产品: 质控品、干扰物质、抗体抗原、elisa试剂盒、动物血制品、生化试剂盒、溶液类试剂、生化试剂、实验耗材等
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文献和实验一般情况下,瞬时转染是将 DNA 导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中,重组 DNA 导入感染性强的细胞系以获得目的基因暂时但高水平的表达。转染的 DNA 不必整合到宿主染色体,可在比稳定转染较短时间内(最多一周左右)收获转染的细胞,并对溶解产物中目的基因的表达进行检测。如果过表达基因用质粒,如果敲降用的是 siRNA(在 microRNA 实验中,过表达用的是 mimics,敲降用的是 inhibitor)。通过瞬时转染,将目的基因敲降或者过表达(gain and loss 实验),观察下游
都得到优化,并加入合适配比和数量的转染复合物(转染试剂-质粒)后,就可获得至少达到平均表达水平的稳定表达克隆。 瞬时转染和稳定转染 制备一种稳定细胞系的第一步是选择一种同时含有选择性标记物和目的基因的载体。选择性标记物通常是可以产生一种蛋白质或者酶来帮助细胞在某些毒性物质存在下存活的基因。 一旦选好了质粒载体,无论瞬时或者稳定表达都采用一样的转染方法。在加入选择性试剂之前,被转染的细胞至少要在标准培养基中培养过夜。这样就使细胞有时间表达足量的蛋白使之能够耐受选择性试剂的作用。细胞于是在加有选择
后在培养基中加入PHA-L和PMA可以激活Jurkat细胞中CMV启动子,而单PMA就足以激活KG1和K562(人骨髓瘤白细胞)中的CMV启动子。SV40启动子的表达在含有大T抗原(存在于COS-1和COS-7)时会提高,因为大T抗原可以刺激染色体外的合成。 06DNA量 高质量的DNA对于进行高效的转染至关重要。转染的质粒一定纯度好、浓度高、无内毒素。浓度不要低于0.35ug/ul。产物表达,48小时mRNA表达最高;72h蛋白表达最高。 07瞬时/稳定转染表达 稳定基因表达符合长期生产需求
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