Bio RT 高灵敏 cDNA 第一链合成试剂盒Ⅱ（需配套特

如何获得高质量、高可信度的荧光定量PCR结果--高质量cDNA标准

，TIANGEN），将基因组DNA去除完美整合到反转录步骤中，采用全新的gDNase Buffer，可3 min快速去除基因组DNA残留，操作简便，无需氯仿抽提纯化步骤；而后利用高效FastQuant RT Enzyme完成cDNA第一链的合成及gDNase灭活仅需18 min，并且所有反应均在同一离心管中完成，大大简化了操作步骤，节省了时间，被称为“21 min的一管式革命”。 图2 图3 高质量cDNA应能准确反映样本真实的转录情况 RNA纯化方法多种

RT-PCR

)或随机引物代替基因特异性引物（GSP）用于第一链合成。由于RNA模板存在二级结构，如环状结果，有可能导致GSP无法与模板退火；或SSⅡ反转录酶无法从此引物进行有效延伸。*目的mRNA中含有强的转录中止位点，可以试用以下方法解决：a. 将第一链的反应温度提高至50℃。b. 使用随机六聚体代替Oligo(dT)进行第一链反应。 3. 产生非特异性条带 *用RT阴性对照检测是否被基因组DNA污染。如果RT阴性对照的PCR结果也显示同样条带，则需要用DNase I重新处理样品。*在PCR反应中，非特异

RT

相关专题   从RNA到电泳鉴定 一、RT-PCR 原理 提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA 作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA 为模板，用VI 型胶原蛋白的α1 链的编码序列的特异性引物进行PCR 扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR 使RNA 检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA 样品分析成为可能。该技术主要用于：分析基因